人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)

貨號：HRCL-031/DDP

細胞介紹

這株細胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細胞耐藥亞株。。

細胞特性

1） 來(lái)源：肺癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣

3） 含量：>1x10⁶ 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞培養步驟

一． 培養基及培養凍存條件準備：

注意：客戶(hù)收到細胞后按照下面的要求操作：培養瓶里面的培養液是不含藥物的。待細胞長(cháng)到 70-80%的匯合度時(shí)，去掉培養液，加入含 500ng/ml DDP藥物的培養液，放入培養箱，這段時(shí)間肯定會(huì )有小部分細胞懸浮起來(lái)，但是不要緊，通過(guò)換液可以去掉，下面的細胞待長(cháng)滿(mǎn)就可以消化傳瓶了，這時(shí)可以一直用含藥培養液來(lái)消化培養細胞，一兩代之后可以將藥物濃度提高到 800ng/ml，含藥培養液用于細胞培養都沒(méi)問(wèn)題的，凍存的時(shí)候就不要在凍存液里面加藥物了。

1） 準備1640培養基(Gibco)，90%；胎牛血清，10%，添加PS，1%，1~2ug/ml DDP。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。