BCA蛋白定量試劑盒說(shuō)明書(shū)

BCA Protein Assay Kit

BCA蛋白定量試劑盒

目錄號：K0014

保存條件：BSA標準品2-8℃保存，其它組分室溫保存。

組分說(shuō)明

            Cat. No.                             K0014

            Kit Size             500 次/微孔，50 次/試管

            試劑  A                100 ml

            試劑  B                3 ml

            BSA 標準品 （2mg/ml）        2 ml

               本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途  

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

　　BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于  BCA（Bicin

-choninic   Acid）法研制而成，實(shí)現了對蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其

原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結構能與Cu²⁺絡(luò )合生成絡(luò )合物，同時(shí)將Cu²⁺還

處原成有高的光吸收Cu⁺。BCA試劑值，可敏感特異地與顏色的深淺與蛋白Cu結質(zhì)濃合，形成度成正比，可根據吸收穩定的有顏色的復值合物。在的大小來(lái)562測 定蛋nm白質(zhì)的含量。本試劑盒含有牛血清白蛋白（ BSA）溶液作為蛋白質(zhì)標準品溶液，測定范圍為20～2000 μg/ml。

注意事項

1．本產(chǎn)品可以采用分光光度計（試管檢測法）或者酶標儀（微孔檢測法）測定蛋白濃度。

2．建議每次測定蛋白樣品時(shí)，繪制標準曲線(xiàn)，以獲得準確數據。

3．BSA標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致（可用1×PBS或0.9%生理鹽水進(jìn)行

   稀釋?zhuān)?/span>

4．完成37℃孵育30分鐘或室溫孵育2小時(shí)后，須在3-5分鐘內完成檢測，否則會(huì )影響蛋

   白定量的準確度。

5．如待測樣品中含較多的干擾物質(zhì)（具體見(jiàn)附表1），可采用Bradford法蛋白定量試劑

   盒（K0013）或其他蛋白定量產(chǎn)品。

操作步驟

1．稀釋BSA標準品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標準品。

管號      稀釋液用量（μl）  BSA標準品用量（μl）   BSA標準品終濃度（μg/μl）

A                0                100                  2

B               200               200                       1

C               200         200（從B管中?。?              0.5

D               200         200（從C管中?。?              0.25

E               200         200（從D管中?。?             0.125

F               200         200（從E管中?。?             0.0625

G               200                0                       0（空白）

2．配置BCA工作液：

   1）計算BCA工作液總量：                      

   BCA工作液總量=（BSA標準品樣本個(gè)數+未知樣本個(gè)數）×復孔數×每個(gè)樣本BCA工作液體積

   舉例：BSA標準品樣本個(gè)數為7個(gè)，未知樣本個(gè)數2個(gè)，復孔數3個(gè)。

   試管檢測法：

   BCA工作液總量=(7個(gè)BSA標準品樣本+2個(gè)未知樣本)×3個(gè)復孔×2 ml/每個(gè)樣本工作液體積=54 ml

   微孔檢測法：

   BCA工作液總量=(7個(gè)BSA標準品樣本+2個(gè)未知樣本)×3個(gè)復孔×200 μl/每個(gè)樣本工作液體積=5.4ml

   2）根據計算出的BCA工作液需要總量，將試劑A和試劑B按照50：1的體積比，配制

   BCA工作液，充分混勻。

   注意：1）由于加樣可能存在誤差，建議配制BCA工作液時(shí)，多配制1-2個(gè)孔。

   2）新配制的BCA工作液室溫密封條件下可穩定保存24小時(shí)。

3．定量檢測

3a.試管檢測法（蛋白濃度檢測范圍：20-2000 μg/ml）

   1）按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各100 μl

   分別加到作好標記的試管中。推薦每個(gè)測定的樣本做2-3個(gè)平行反應。

   2）向每個(gè)試管中各加入2 ml BCA工作液，充分混勻，37℃水浴中孵育30分鐘或室

   溫孵育2小時(shí)。

   3）將各管冷卻至室溫。

   4）用分光光度計在562 nm處測定每個(gè)樣品及BSA標準品的吸光值，同時(shí)做好記錄。

   5）繪制標準曲線(xiàn)，計算樣品中的蛋白濃度。

3b.微孔檢測法（蛋白濃度檢測范圍：20-2000 μg/ml）

   1）按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各25 μl分

   別加到作好標記的96孔板微孔中。推薦每個(gè)測定的樣本做2-3個(gè)平行反應。

   2）每孔加入200 μl BCA工作液，充分混勻，蓋上96孔板蓋，37℃孵育30分鐘。

   3）冷卻至室溫。

   4）用酶標儀在540-590 nm范圍內，測定每個(gè)樣品及BSA標準品吸光值，做好記錄。

   5）繪制標準曲線(xiàn)，計算樣品中的蛋白濃度。

   注意：1）BCA法測定蛋白濃度時(shí)，吸光值會(huì )隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)不斷加深。因此所有樣品測定需在3-5 分鐘內完成，否則會(huì )影響蛋白定量的準確度。

   2）建議以去除背景值后的吸光值讀數繪制標準曲線(xiàn)。

   3）由于操作誤差導致標準品讀數嚴重偏離線(xiàn)性曲線(xiàn)的應舍去。

   4）未知樣品濃度可以從標準曲線(xiàn)方程中計算得出, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。

   5）如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內，請重新稀釋樣品后再次測定。

    4．BCA蛋白定量分析結果舉例：

實(shí)驗代做服務(wù)：