免疫組化試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

保存方法：2-8℃保存。     有效期：一年。     生產(chǎn)日期：見(jiàn)封口。

工作原理：

辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不會(huì )遮蓋抗原的結合部位，具有較高活性及特異性，可溶性佳，生成的產(chǎn)物不擴散，可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強，易進(jìn)入細胞內。DAB在 H2O2存在的情況下，可以作為HRP的電子供體，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑。

試劑盒內容：

自備試劑：無(wú)水乙醇、蘇木素。

操作步驟：

1. 60℃常規脫蠟至水后，將石蠟切片先后浸入二甲本苯Ⅰ，二甲本苯Ⅱ各10min。然后逐級降濃度酒精入水，每次3-5 min。

2.熱修復抗原： 將切片置于0.01mol/L pH6.0枸櫞鈉緩沖液，微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10 min后，反復1-2 次，置于室溫自然冷卻。0.01 mol/L  pH6.0的PBS洗滌3次，每次5 min

3.消除內源性過(guò)氧化物酶：用3% H ₂ O ₂ 室溫孵育 5-10 min，以消除內源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次，每次5 min；

4.滴加一抗： 滴加適當稀釋的一抗到切片上，37℃孵育1小時(shí)左右或者4℃過(guò)夜， pH7.4的PBS洗滌3次，每次5 min 。（一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō)，陽(yáng)性染色強度不夠時(shí)，可提高一抗濃度和延長(cháng)孵育時(shí)間；背景過(guò)高時(shí)，可降低一抗濃度和縮短孵育時(shí)間。）

5.加入廣譜二抗，37℃孵育1小時(shí)，取出后PBS洗滌3次，每次5 min。

6.DAB顯色： 取DAB顯色液I及II各50微升加至入1mL的水中，配成DAB工作液，滴加到切片上，室溫顯色，鏡下控制反應時(shí)間。若無(wú)背景出現則可繼續顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應。

7..觀(guān)察顯色后自來(lái)水沖，蘇木目精復染1-2min，，自來(lái)水沖10min，梯度酒精脫水，二甲本苯透明，中性樹(shù)膠封片，干燥，分析拍照

實(shí)驗代做服務(wù)：