EA.hy926 人臍靜脈細胞融合細胞

Catalogue No.: C024

Product Format: a T25 flask

Culture Properties：貼壁

Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components  

Operation steps for cell culture

• 吸走用于培養基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養瓶潤洗細胞；
• 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養皿使胰酶浸沒(méi)細胞表面，培養瓶放37度培養箱消化；
  （細胞對于消化比較敏感，消化過(guò)度會(huì )嚴重影響細胞狀態(tài)，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長(cháng)。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時(shí)即可終止，禁止消化到細胞*漂浮?；靹蚣毎麜r(shí)盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
• 加入6-8ml*培養基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；
• 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養基重懸37度培養箱繼續培養；

傳代比例: 不同細胞生長(cháng)速度不一，具體傳代比例視細胞生長(cháng)速度而定，大部分細

胞適用1:3-1:4傳代，生長(cháng)較慢的細胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養基+8%DMSO（可以根據實(shí)驗室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過(guò)夜后液氮保存。

Tips：

• 細胞經(jīng)過(guò)運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞si亡破碎形成碎片，是正?，F象。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養基重懸接種到新的培養瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
• 細胞生長(cháng)不均時(shí)，可以將細胞消化吹散后加入新的培養基重新接種或傳代。
• 細胞生長(cháng)緩慢時(shí)，可以選擇提高血清濃度培養（最高不超過(guò)20%），也可以根據細胞生長(cháng)狀態(tài)，選擇傳代細胞到新的培養瓶中繼續培養。
• 不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時(shí)間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準，嚴禁消化到細胞*漂浮。客戶(hù)消化過(guò)度導致細胞死亡、漂浮、生長(cháng)緩慢，不提供免費售后服務(wù)。
• 干冰發(fā)貨均為兩支，客戶(hù)先復蘇一支，若復蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導下復蘇第二支。若客戶(hù)同時(shí)復蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供免費售后服務(wù)。
• 細胞狀態(tài)正常時(shí)，應盡快凍存細胞保種，凍存后應隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶(hù)凍存細胞導致死亡負責，客戶(hù)凍存細胞死亡不提供免費售后服務(wù)。

Notice：

      客戶(hù)收到細胞有任何疑問(wèn)請及時(shí)致電我們，細胞收到后1周內沒(méi)有任何電話(huà)，或其他形式回訪(fǎng)，默認為細胞質(zhì)量沒(méi)問(wèn)題，之后出了任何問(wèn)題不給予免費售后。細胞免費售后只提供一次，若重發(fā)后再次培養死亡不再免費補發(fā)，細胞收貨時(shí)已經(jīng)死亡或密度不足的除外。

實(shí)驗代做服務(wù)：