HELA+luc人宮頸癌細胞 熒光素酶標記

HELA+luc HELA luciferase labeling of human cervical cancer cells ,HELA luc

貨號：YJ-0056a（STR（hela鑒定））

價(jià)格： 3200.0

規格： 1*10 ⁶

細胞介紹

角蛋白免疫過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性。 有報告稱(chēng)MS751細胞含有人乳頭狀瘤病毒18 (HPV-18)序列。據報道，p53表達水平低，pRB(成視網(wǎng)膜細胞瘤抑制因子)表達水平正常。

該細胞通過(guò)慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

細胞特性

1） 來(lái)源：宮頸腺癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長(cháng)

3） 含量：>1x10⁶ 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細胞篩選

該細胞為穩定轉染Luc的細胞，隨細胞傳代次數的增加，其Luc熒光強度會(huì )逐漸減弱。若實(shí)驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。        

建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細胞篩選時(shí)，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養基維持培養，若無(wú)細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養基繼續篩選，以此類(lèi)推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養基培養，至細胞密度約80%，可繼續加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養基正常培養。

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現污染，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞接收后的處理

1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養瓶的狀況，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為細胞需要售后時(shí)提供收到細胞時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3） 觀(guān)察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過(guò)程中貼壁細胞會(huì )有脫落的現象，如發(fā)現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長(cháng)，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基）。

6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代 。

細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備MEM（推薦YJ-0012）培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4 . 收到細胞后首次傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中，建議客戶(hù)凍存一支備用，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行。

細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。

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