大鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒

貨號：YJ-P8630

價(jià)格： 1080.0

規格： 200ml

產(chǎn)品介紹

本分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡甲胺的混合液?？鼓庵苎稍诜蛛x液中分層。離心時(shí)，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細胞與粒細胞聚集并迅速沉降；此時(shí)，淋巴細胞及其他單個(gè)核細胞仍處于分離液上層，紅細胞污染可忽略不計。大部分血小板可在細胞清洗低速離心過(guò)程中去除。 其他人及動(dòng)物多種比重細胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數及細胞帶電不同，用戶(hù)在制定分離液時(shí)應提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細胞的名稱(chēng)。

適用于從動(dòng)物抗凝血液中分離淋巴細胞，無(wú)菌條件下所分離的淋巴細胞可用于細胞培養等。本品僅供科研使用。

密度：1.0830±0.0001g/ml

本品易感染細菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。

產(chǎn)品內容：

各種動(dòng)物外周血淋巴細胞分離液 200mL

全血及組織稀釋液 200mL

細胞洗滌液 200mL

保存：18℃-25℃保存，有效期兩年。本品易感染細菌，需無(wú)菌條件下操作。無(wú)菌條件下操作，啟封后常溫保存。如4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液（當稀釋后血液體積小于3mL時(shí)，加入3mL分離液；大于等于3mL，加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì )影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時(shí)間較長(cháng)，在離心之前出現紅細胞成團下沉屬正?，F象。）

3. 室溫，水平轉子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長(cháng)，最佳的分離條件需摸索，離心轉速最大不超過(guò)1200g）。

4. 離心后將出現明顯的分層：最上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層，離心管底部是紅細胞與粒細胞。

5. 小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中， 10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g，離心10min。

6. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。

7. 重復步驟6

8. 棄上清，細胞重懸備用。

注意事項：

A. 開(kāi)封前顛倒混勻，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品，為延長(cháng)分離液保存時(shí)間，請在無(wú)菌條件下啟封，避免微生物污染。。

B. 分離液使用時(shí)應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì )導致白膜層中紅細胞污染加重。

C. 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以?xún)龋?，為保持淋巴細胞的活性，應避免冷凍和冷藏?/span>

D. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養液，其成分會(huì )導致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。

E. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì )導致細胞掛壁，影響分離效果。

F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì )影響分離效果，可以調節離心轉數和離心時(shí)間，摸索最佳的分離條件。

G. 吸取過(guò)多的淋巴細胞層及分離液層會(huì )導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數量增加；吸取過(guò)多的血漿層可能會(huì )導致淋巴細胞中血漿蛋白及血小板污染。

H. 如果要進(jìn)一步對分離的細胞進(jìn)行培養，那在收集血液和分離過(guò)程中，注意無(wú)菌操作，避免微生物污染。

I. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數及細胞帶電不同，用戶(hù)在制定分離液時(shí)應提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細胞的名稱(chēng)。

注意事項

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。

2. 為了您的安全和健康，請穿好實(shí)驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

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