傳代培養的方法及其注意事項

原理
細胞在培養瓶長(cháng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長(cháng)，同時(shí)也將細胞數量擴大，就必須進(jìn)行傳代（再培養）。 傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養細胞進(jìn)行各種實(shí)驗的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
材料和試劑
1. 細胞：貼壁細胞株
2. 試劑：0.25％胰酶、1640培養基（含10％小牛血清）
3. 儀器和器材：倒置顯微鏡、培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等
操作步驟
1. 吸除培養瓶?jì)扰f培養液。
2. 向瓶?jì)燃尤胍鹊鞍酌负?/span>EDTA混合液少許，以能覆滿(mǎn)瓶底為限。
3. 置溫箱中2~5分鐘，當發(fā)現細胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大后，立即終止消化。
4. 吸除消化液，向瓶?jì)茸⑷?/span>Hanks液數毫升，輕輕轉動(dòng)培養瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液?jiǎn)为毾?，吸除胰蛋白酶液后，可不?/span>Hanks液沖洗，直接加入培養液。
5. 用吸管吸取營(yíng)養液輕輕反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。
6. 計數板計數后，把細胞懸液分成等份分裝入數個(gè)培養瓶中，置溫箱中培養。
無(wú)菌操作注意事項 
1. 操作前要洗手，進(jìn)入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
2. 點(diǎn)燃酒精燈，操作在火焰附近進(jìn)行，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時(shí)間不能太長(cháng)，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過(guò)營(yíng)養液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。
3. 操作動(dòng)作要準確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機會(huì )。
4. 不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺面上用品要布局合理。
5. 瓶子開(kāi)口后要盡量保持45℃斜位。
6. 吸溶液的吸管等不能混用。                                

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