細胞培養關(guān)鍵事項

1.如何選用培養基？
培養某一類(lèi)型細胞沒(méi)有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(cháng)?？傊?，選MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養，各種目的無(wú)血清培養的選是AIM V培養基（SFM）。在開(kāi)始進(jìn)行新的細胞培養時(shí)，可以參考下表所列的條件：

2.為什么要熱滅活血清？
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養ES細胞、昆蟲(chóng)細胞和平滑肌細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

3.L－谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？
L－谷氨酰胺在細胞培養時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L－谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L－谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì )降解，但是確切的降解率一直沒(méi)有最終確定。L－谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。

4.GlutaMAX-I是什么？培養細胞如何利用GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩定？
GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，將其不穩定的α－氨基用L－丙氨酸來(lái)保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L－谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L－谷氨酰胺幾乎完全降解。

5.為什么培養基中可以省去加酚紅？
酚紅在培養基中被用來(lái)作為PH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類(lèi)反應，培養細胞，尤其是哺乳類(lèi)細胞時(shí)，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時(shí)，不使用加有酚紅的培養基。

6.如何用臺盼蘭計數活細胞？
用無(wú)血清培養基把細胞懸液稀釋到200－2000個(gè)/毫升，在0.1毫升的細胞中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數分鐘后，用血球計數板計數細胞?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。

7.如何消除組織培養的污染？
當重要的培養污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開(kāi)，用實(shí)驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺，檢查HEPA過(guò)濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實(shí)驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂(lè )菌素時(shí)尤其重要。

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