WB實(shí)驗注意細節

1. 細胞樣本，收細胞時(shí)， PBS預冷。

2. 組織樣本在取材時(shí)離體組織應盡快凍存，可以置于液氮中迅速冷凍，使用組織勻漿機進(jìn)行勻漿時(shí)， 一次研磨時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)， 40s左右即可，如研磨不充分，可再次研磨。

3. PMSF應注意搖勻至無(wú)結晶時(shí)方可使用。

4. 冰上裂解時(shí)，可以晃動(dòng)以使裂解充分。

5. 裂解后的樣本盡量分裝保存，避免反復凍融，盡快變性使用。

6. BCA定量時(shí)盡量不使用96孔板最邊緣一圈（由于有些儀器邊緣效應）。

7. 樣本可以根據具體情況稀釋合適的倍數再進(jìn)行定量，以免超出標曲范圍。

8. BCA定量時(shí)，可以使用儀器中速輕微震蕩3-10秒，混勻96孔板內液體，再進(jìn)行測量。

9. 變性時(shí)，注意加熱后小心管蓋爆開(kāi)。

10. 配膠時(shí)，板子一定徹底清洗干凈。

11. 配膠的各組分注意充分混勻。

12. 點(diǎn)樣時(shí)，多余的孔可以用loading buffer補齊。

13. 轉膜時(shí)， 一定帶手套才可以觸碰濾紙和膜，以防污染。

14. 轉膜不可放反，牢記黑膠白膜，注意電極正負極。

15. 封閉時(shí)， BSA或牛奶一定充分溶解。

16. 抗體種屬要注意區分。

17. 洗膜要充分。

18. 顯影液應滴加均勻。

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