DNA轉染試劑說(shuō)明書(shū)

DNAFect Transfection Reagent

目錄號：YJ0860

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組分說(shuō)明

                                 Catalogno.               YJ0860          YJ0860A

                                    KitSize                 0.5 ml            1 ml

                        DNAFect Transfection Reagent         0.5 ml          1 ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

DNAFect是一種的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉染試劑，適用于多種細胞的DNA轉染。對于大多數細胞系包括原代細胞都有較高的轉染效率，并且對細胞毒性極低。本轉染試劑可應用于瞬時(shí)轉染、穩定轉染、共轉染、高通量DNA轉染，基因表達和基因功能研究。

注意事項

 1.轉染試劑使用前應先震蕩搖勻。

 2.轉染效率與細胞密度有很大關(guān)系，不同實(shí)驗間應保持一個(gè)基本的傳代步驟，確保轉染時(shí)細胞沒(méi)有長(cháng)滿(mǎn)或處于靜止期。

    一般貼壁細胞轉染的*細胞密度是80-90%，懸浮細胞的*細胞密度為3-5×10 5細胞/ml，用于轉染的*細胞密度

3. 轉應染根據不同的時(shí)不要在培細養胞基中加入抗生素，否類(lèi)型或用途而異。則會(huì )導致細胞死亡。  

操作步驟

     對于大部分的細胞系， DNA與DNAfect的比例在1:2至1:3時(shí)轉染效率較高。為了提高轉化效率、表達水平并且減少細胞毒性，實(shí)驗應在細胞密度較大時(shí)進(jìn)行轉染。以下操作以24孔板每孔細胞的DNA轉染操作為例。

     1.   貼壁細胞：轉化前一天，在24孔板的每孔中加入500 μl無(wú)抗生素的生長(cháng)培養基，并于每孔中接種0.5-2×105 個(gè)細懸浮細胞：在胞，待細胞轉細染之前，在胞長(cháng)至80-90%24孔板的滿(mǎn)時(shí)進(jìn)每行孔中加入轉染。500μl無(wú)抗生素的生長(cháng)培養基，并于每孔中接種3-5×10 5個(gè)細胞。

     2.   轉染當天，首先準備轉染復合物，對于每孔細胞按照以下用量配制：

          a. 取適量DNA，加入25 μl無(wú)血清培養基，并輕輕的混合均勻。

          b. 取適量DNAfect，加入25 μl無(wú)血清培養基，輕輕混勻，并于室溫孵育5分鐘。

          c. 孵育5分鐘之后，將稀釋的DNA和稀釋的DNAfect混合（使DNA以及DNAfectin的終總體積為50 μl），輕輕混合均勻，并在室溫下孵育20分鐘（溶液可能會(huì )出現絮狀，但不會(huì )影響轉染效率）

              

    注意：該混合物在室溫下可以穩定保存6小時(shí)。

     3.   將步驟1中24孔板中培養的細胞生長(cháng)培養基更換成450 μl無(wú)血清培養基，然后將步驟2中50 μl轉染復合物加入到24細胞孔板內，輕輕前后推動(dòng)24孔板以混勻。

     4.   將細胞置于含5%CO2，37℃條件下培養4-6小時(shí)后，更換成500 μl生長(cháng)培養基。

     5.   18-48小時(shí)后進(jìn)行轉染基因表達的檢測。

     6.   對于穩定的細胞系：在轉染24小時(shí)后，細胞按照1:10的比例傳代，第二天可加入篩選培養基進(jìn)行篩選。

        注：(1) 該說(shuō)明為一個(gè)24孔的用量，若同時(shí)轉幾個(gè)孔，配制轉染復合物的量需加倍；若轉染其他類(lèi)型孔板，DNA和DNAfect用量見(jiàn)附表，

              該附表用量以293T細胞為轉染細胞時(shí)的標準用量。

             (2) 轉染4-6小時(shí)后也可以不更換生長(cháng)培養基，但由于DNAfect具有一定的細胞毒性，作用時(shí)間過(guò)長(cháng)可能使某些細胞出現大量死亡現象，建議更換生長(cháng)培養基。

            (3) 優(yōu)化條件：想要得到更高的轉染效率，應優(yōu)化轉染條件：培養物、DNA濃度、細胞數和細胞與DNA復合物的孵育時(shí)間等條件都應進(jìn)行優(yōu)化。