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豚鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間:2016-07-27 點(diǎn)擊量:2725

豚鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒說(shuō)明書(shū)

 

(細胞培養及分子生物學(xué))

 

【產(chǎn)品規格】

 

200ml/Kit

 

貨號:WBC1085Z

 

【產(chǎn)品組成】

 

為方便廣大用戶(hù)使用,試劑內容如下:

 

 

 

 

名稱(chēng)

產(chǎn)品編號

 

規格

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

A

豚鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液

 

 

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

B

樣本稀釋液(贈品)

2010C1119

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

C

清洗液(贈品)

 

 

2010X1118

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

D

F 液(贈品)

 

 

F2013TBD

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

E

紅細胞裂解液(贈品)

NH4CL2009

 

100ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

F

說(shuō)明書(shū)

 

 

 

 

 

1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【實(shí)驗前準備】

 

 

 

 

 

 

 

A 適用儀器

 

 

 

 

 

 

 

 

zui大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機

 

 

 

 

 

B 耗材

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

產(chǎn)品名稱(chēng)

 

產(chǎn)品貨號

 

產(chǎn)地

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15ml 離心管散裝

 

339650

 

美國 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15ml 離心管架裝

 

339651

 

美國 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

50ml 離心管散裝

 

339652

 

美國 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

50ml 離心管架裝

 

339653

 

美國 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

無(wú)菌膠頭滴管或塑料滴管

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【檢驗方法】

 

 

 

 

 

 

 

 

全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

 

  • 首先制備組織單細胞懸液,制備方法詳見(jiàn)組織單細胞懸液制備技術(shù)。

 

  • 取一支 15ml 離心管,加入與制備的組織單細胞懸液等量的分離液(注:分離液zui少不得少于 5ml)。

 

 

  • 用吸管小心吸取制備的組織單細胞懸液加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min。(注:根據組織單細胞懸液樣本量確定離心條件,組織單細胞懸液量越大,離心力越大,離心時(shí)間越長(cháng),具體離心條件需客戶(hù)自行摸索,以達到*分離效果)。

 

  • 離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細胞層(一層或兩層),加入 10 ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細胞。250g,離心 10min。重復洗滌 2-3 次,即得所需白細胞。

 

  • 如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液(產(chǎn)品編號:NH4CL2009)裂解紅細胞,具體操作方法詳見(jiàn)紅細胞裂解液使用說(shuō)明。

 

【注意事項】

 

  • 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實(shí)驗結果,在取樣 2h 內進(jìn)行實(shí)驗,樣品存放時(shí)間越長(cháng),細胞分離效果越差。樣品放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

 

  • 本實(shí)驗不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì )變成毛面,影響細胞分離效果。

 

  • 分離液用量大于制備的組織單細胞懸液樣本時(shí),分離效果更佳。

 

  • 如實(shí)驗后細胞得率或活性過(guò)低,請上海研謹技術(shù)以尋求幫助。

 

【儲存條件及有效期】

 

18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,啟

 

封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。

 

【參考值(參考范圍)】

 

本實(shí)驗白細胞提取率及純度大于 80%。

 

下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例,用戶(hù)可適當進(jìn)行參考。

 

 

紅細胞

 

白細胞

 

血小板

 

 

 

 

 

 

 

 

4.0-10.0×109

 

含量(個(gè)/L

4.0-5.5×1012

中性粒細胞

淋巴細胞

單核細胞

1.0-3.0×1011

 

 

50%-70%

20%-40%

3%-8%

 

 

 

 

 

 

 

 

【相關(guān)實(shí)驗技術(shù)方案】

 

1. 組織單細胞懸液制備技術(shù)

 

 

  • 所獲得白細胞的培養技術(shù)。

 

  • 所獲得白細胞的核酸提取技術(shù)。

 

  • 所獲得白細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)
  • B.免疫組化技術(shù)
  • C.原位雜交技術(shù)

 

D.PCR 技術(shù)

 

注:上述技術(shù)方案詳情請登陸本公司搜索細胞分離、

 

純化、擴增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊,并在說(shuō)明書(shū)項目欄下下載使用。

 

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】

 

1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示:

 

出現情況

出現原因

建議解決方案

 

 

 

離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層

轉速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短

適當增減轉速

 

 

離心后目的細胞存在于分離液中

轉速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(cháng)

 

 

 

 

離心后白環(huán)層彌散

細胞密度過(guò)大

調整細胞密度

 

 

離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)

細胞密度過(guò)小

 

 

 

 

 

  • 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區客戶(hù)可根據當地情況對離心條件進(jìn)行適當調整。建議對離心條件進(jìn)行調整時(shí),恒定離心時(shí)間,對離心轉速進(jìn)行調整。

 

  • 本分離液依照標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同,可

 

能出現紅細胞沉降不*的情況,可以適當加大離心轉速。

 

注:在對離心條件進(jìn)行調整時(shí),離心轉速的加減以 50-100g 為基數,直至達到*分離效果,

 

離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準。

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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