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豬胰島細胞分離液試劑盒

豬胰島細胞分離液試劑盒

產(chǎn)品型號: ISHY2011P

所屬分類(lèi):分離液試劑盒

產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-28

簡(jiǎn)要描述:本品用于分離豬胰島細胞
Store at: RT° C Size :2X100ml/kit
試劑盒內容
試劑:全血及組織稀釋液 100ml
試劑:細胞洗滌液 100ml
試劑B: 100ml
試劑D: 100ml
說(shuō)明書(shū) 1份

詳細說(shuō)明:

操作說(shuō)明 細胞分離液試劑盒操作說(shuō)明::::

Store at:::RT 試劑盒規格::::2×100ml/Kit

豬胰島細胞分離液試劑盒

貨號                     品牌              產(chǎn)品名稱(chēng)          規格         報價(jià)

LGS1086CWTBD雞外周血造血干細胞分離液100ml400
LGS1074TBD猴骨髓間充質(zhì)干細胞分離液200ml400
LGS1074WTBD猴外周血造血干細胞分離液200ml400
LGS1106TBD豬骨髓間充質(zhì)干細胞分離液100ml400
LGS1106WTBD豬外周血造血干細胞分離液100ml400
LGS1090HTBD馬骨髓間充質(zhì)干細胞分離液100ml400
LGS1090HWTBD馬外周血造血干細胞分離液100ml400
LGS1083TBD羊骨髓間充質(zhì)干細胞分離液100ml400
LGS1083WTBD羊外周血造血干細胞分離液100ml400
LGS1076FTBD魚(yú)干細胞分離液100ml400
白細胞分離液    
WBC1077TBD人外周血白細胞分離液試劑盒2*100ml600
WBC1077-1TBD人外周血白細胞分離液試劑盒(FICOLL配置)2*100ml600
WBC1083TBD大鼠外周血白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1083PTBD大鼠臟器組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1083ZTBD大鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1092TBD小鼠外周血白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1092PTBD小鼠臟器組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1092ZTBD小鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC10965TBD兔外周血白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC10965PTBD兔臟器組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC10965ZTBD兔腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒100ml600

全血及組織稀釋液 100ml

細胞洗滌液 100ml

試劑 B 100ml

試劑 D 100ml

說(shuō)明書(shū) 1

一、、、、分離方法說(shuō)明及圖例

A. 10ml 15ml 玻璃離心管中依次小心加入 B、D 兩種液體各 2ml,制成梯度界面(各液面分層一定要清晰);

B.取 1ml新鮮抗凝血與全血及組織稀釋液(Cat#2010C111911混合并小心加于D液之液面上;或取組織勻漿單細胞懸液(細胞濃度為2×108-1×109個(gè)/ml,具體制備方法參照

“二、組織單細胞懸液的制備”)小心加于D液之液面上;

C. 400g(約1500/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉子);

此時(shí)離心管中由上至下細胞分為五層。*層;為血漿層或組織勻漿液層。第二層;為

富含胰島細胞的 D 液層。。。。第三層;為單個(gè)核細胞層。第四層;為透明 B 液層。第五層;為紅細胞層。收集第二層富含胰島細胞的 富含胰島細胞的 富含胰島細胞的 D 液層放入含 4-5ml 細胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 /分)離心 20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌 2 次即得所需胰島細胞。

注::::A. 提取率約為 80%。

注::::A.. .. 本說(shuō)明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說(shuō)明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說(shuō)明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,,,,酶消化法由于各實(shí)驗室選取的消化 酶消化法由于各實(shí)驗室選取的消化酶種類(lèi)各不相同, 酶種類(lèi)各不相同,,,請各實(shí)驗室自行選擇進(jìn)行試驗 請各實(shí)驗室自行選擇進(jìn)行試驗 請各實(shí)驗室自行選擇進(jìn)行試驗。。。。全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境 全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境 全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境。。。。 剪碎法::::將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網(wǎng)

(另購)過(guò)濾到試管內;離心沉淀 1500/分×3 min,再用細胞洗滌液清洗 3次,每次以 500rpm短時(shí)低速離心除去細胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過(guò)濾去細胞團塊。作細胞計數并調整細胞濃度為(25)×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109個(gè)/ml 的單細胞懸液備用。

勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內,加入 2ml 組織勻漿液及 20% 勻漿器法胎牛血清;緩慢轉動(dòng)研棒,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器;收集細胞懸液,經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過(guò)濾;離心沉淀 800rpm×2min ,再用細胞洗滌液洗 3 次,離心沉淀。作細胞計數并調整細胞濃度為(25)×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109 個(gè)/ml 的單細胞懸液備用。 細胞計數方法: 細胞計數法是用來(lái)計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板(血球計數板)進(jìn)行。既可用于分離(散)細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,也可用于

對培養物的細胞數量進(jìn)行計數。不論計數的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。

1)、在細胞計數板中央放置計數的蓋玻片。

2)、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液,至

蓋玻片被液體充滿(mǎn)為止。

3)、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線(xiàn)的細胞只計數在上線(xiàn)和左線(xiàn)者,

對于細胞團按單個(gè)細胞計數。

4)、按下式計數細胞懸液的密度:

細胞密度=(4 個(gè)大格細胞總數/4)×104個(gè)/ml×稀釋倍數

公式中乘以 104因為計數板中每一個(gè)大格的體積為:

1.0mm(長(cháng))×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3

  1ml1000mm3

細胞計數要點(diǎn)::::

A 進(jìn)行細胞計數時(shí),要求懸液中細胞數目不低于 104個(gè)/ml,如果細胞數目很少要進(jìn)行離

心再懸浮于少量培養液中;顯微鏡下計數時(shí),遇到 2 個(gè)以上細胞組成的細胞團,應按單個(gè)細胞計算。如果細胞團>10%,說(shuō)明細胞分散不充分; 或細胞數<200 個(gè)/10mm2>500 個(gè)/10 mm2 時(shí),說(shuō)明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。

B 要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數準確性。

C 取樣前充分混勻細胞懸液,尤其多次取樣更要注意每次取樣都要混勻,以求計數準確;

D 數細胞的原則是只數完整的細胞,若細胞聚集成團時(shí),只按照一個(gè)細胞計算。如果細

胞壓在格線(xiàn)上時(shí),則只計上線(xiàn),不計下線(xiàn),只計左線(xiàn),不計右線(xiàn)。

E 操作時(shí),注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢壑?,否則要重新計數。

初學(xué)者易犯的錯誤: 初學(xué)者易犯的錯誤:::

A 計數前未將待測懸液吹打均勻。

B 滴入細胞懸液時(shí)蓋玻片下出現氣泡。

C 滴入懸液時(shí)的量太多,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。

三、、、、注意事項

A 本分離液是敏光型的,運輸和貯藏過(guò)程中在 18-25避光保存,啟封后 4保存本品只能用于科學(xué)研究,不能用于臨床檢測

避免微生物污染。本品為真空包裝,未啟封前于 10 以下易出現白色結晶,影響分離效果。

B 待分離的血液及組織樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在

20水浴箱中復溫 20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在 20±2時(shí)分離效果,且

所有操作過(guò)程一定要在無(wú)菌條件下進(jìn)行。

C 由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區溫度環(huán)境和四季差異,可能影響分離

效果,用戶(hù)可調節離心轉數及離心時(shí)間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗室自定)。

D 使用無(wú)靜電反應的離心管,推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。

E *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。注意在血液稀釋過(guò)程中應去除抗凝劑體積。

F 分離過(guò)程中所用其他試劑如:羥乙一基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液及

紅細胞裂解液等以我公司產(chǎn)品為*選擇,本公司相關(guān)系列產(chǎn)品無(wú)菌、無(wú)病毒、無(wú)支原體、

低內毒素水平且無(wú)細胞毒性,所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。

四、、、、 產(chǎn)品性能指標

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

內毒素 0.5...EU/ml

無(wú)菌 直接接種培養 14 天后培養基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下

五、、、、 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限

18-25避光保存,有效期兩年。啟封后置 4保存,有效期一周。

注::::若保證無(wú)微生物污染,啟封后可置 4長(cháng)期保存。但應注意保存溫度較低時(shí)本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。

 



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