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狗胰島細胞分離液試劑盒

狗胰島細胞分離液試劑盒

產(chǎn)品型號: ISHY2011G

所屬分類(lèi):分離液試劑盒

產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-28

簡(jiǎn)要描述:本品用于分離狗胰島細胞
Store at: RT° C Size :2X100ml/kit
試劑盒內容
試劑:全血及組織稀釋液 100ml
試劑:細胞洗滌液 100ml
試劑B: 100ml
試劑D: 100ml
說(shuō)明書(shū) 1份

詳細說(shuō)明:

操作說(shuō)明 細胞分離液試劑盒操作說(shuō)明::::

Store at:::RT 試劑盒規格::::2×100ml/Kit

狗胰島細胞分離液試劑盒

貨號                     品牌              產(chǎn)品名稱(chēng)          規格         報價(jià)

WBC1092ZTBD小鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC10965TBD兔外周血白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC10965PTBD兔臟器組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC10965ZTBD兔腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1079TBD狗外周血白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1079PTBD狗臟器組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1079ZTBD狗腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1086TBD牛外周血白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1086PTBD牛臟器組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1086ZTBD牛腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1085TBD豚鼠外周血白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1085PTBD豚鼠臟器組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1085ZTBD豚鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1090CTBD雞外周血白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1090CPTBD雞臟器組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1078HTBD猴外周血白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1078HPTBD猴臟器組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1078HZTBD猴腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒100ml600
WBC1110TBD豬外周血白細胞分離液試劑盒100ml600

全血及組織稀釋液 100ml

細胞洗滌液 100ml

試劑 B 100ml

試劑 D 100ml

說(shuō)明書(shū) 1

一、、、、分離方法說(shuō)明及圖例

A. 10ml 15ml 玻璃離心管中依次小心加入 B、D 兩種液體各 2ml,制成梯度界面(各液面分層一定要清晰);

B.取 1ml新鮮抗凝血與全血及組織稀釋液(Cat#2010C111911混合并小心加于D液之液面上;或取組織勻漿單細胞懸液(細胞濃度為2×108-1×109個(gè)/ml,具體制備方法參照

“二、組織單細胞懸液的制備”)小心加于D液之液面上;

C. 400g(約1500/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉子);

此時(shí)離心管中由上至下細胞分為五層。*層;為血漿層或組織勻漿液層。第二層;為

富含胰島細胞的 D 液層。。。。第三層;為單個(gè)核細胞層。第四層;為透明 B 液層。第五層;為紅細胞層。收集第二層富含胰島細胞的 富含胰島細胞的 富含胰島細胞的 D 液層放入含 4-5ml 細胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 /分)離心 20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌 2 次即得所需胰島細胞。

注::::A. 提取率約為 80%。

注::::A.. .. 本說(shuō)明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說(shuō)明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說(shuō)明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,,,,酶消化法由于各實(shí)驗室選取的消化 酶消化法由于各實(shí)驗室選取的消化酶種類(lèi)各不相同, 酶種類(lèi)各不相同,,,請各實(shí)驗室自行選擇進(jìn)行試驗 請各實(shí)驗室自行選擇進(jìn)行試驗 請各實(shí)驗室自行選擇進(jìn)行試驗。。。。全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境 全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境 全過(guò)程及所需試劑要求無(wú)菌環(huán)境。。。。 剪碎法::::將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網(wǎng)

(另購)過(guò)濾到試管內;離心沉淀 1500/分×3 min,再用細胞洗滌液清洗 3次,每次以 500rpm短時(shí)低速離心除去細胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過(guò)濾去細胞團塊。作細胞計數并調整細胞濃度為(25)×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109個(gè)/ml 的單細胞懸液備用。

勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內,加入 2ml 組織勻漿液及 20% 勻漿器法胎牛血清;緩慢轉動(dòng)研棒,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器;收集細胞懸液,經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過(guò)濾;離心沉淀 800rpm×2min ,再用細胞洗滌液洗 3 次,離心沉淀。作細胞計數并調整細胞濃度為(25)×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109 個(gè)/ml 的單細胞懸液備用。 細胞計數方法: 細胞計數法是用來(lái)計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板(血球計數板)進(jìn)行。既可用于分離(散)細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,也可用于

對培養物的細胞數量進(jìn)行計數。不論計數的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。

1)、在細胞計數板中央放置計數的蓋玻片。

2)、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液,至

蓋玻片被液體充滿(mǎn)為止。

3)、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線(xiàn)的細胞只計數在上線(xiàn)和左線(xiàn)者,

對于細胞團按單個(gè)細胞計數。

4)、按下式計數細胞懸液的密度:

細胞密度=(4 個(gè)大格細胞總數/4)×104個(gè)/ml×稀釋倍數

公式中乘以 104因為計數板中每一個(gè)大格的體積為:

1.0mm(長(cháng))×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3

  1ml1000mm3

細胞計數要點(diǎn)::::

A 進(jìn)行細胞計數時(shí),要求懸液中細胞數目不低于 104個(gè)/ml,如果細胞數目很少要進(jìn)行離

心再懸浮于少量培養液中;顯微鏡下計數時(shí),遇到 2 個(gè)以上細胞組成的細胞團,應按單個(gè)細胞計算。如果細胞團>10%,說(shuō)明細胞分散不充分; 或細胞數<200 個(gè)/10mm2>500 個(gè)/10 mm2 時(shí),說(shuō)明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。

B 要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數準確性。

C 取樣前充分混勻細胞懸液,尤其多次取樣更要注意每次取樣都要混勻,以求計數準確;

D 數細胞的原則是只數完整的細胞,若細胞聚集成團時(shí),只按照一個(gè)細胞計算。如果細

胞壓在格線(xiàn)上時(shí),則只計上線(xiàn),不計下線(xiàn),只計左線(xiàn),不計右線(xiàn)。

E 操作時(shí),注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢壑?,否則要重新計數。

初學(xué)者易犯的錯誤: 初學(xué)者易犯的錯誤:::

A 計數前未將待測懸液吹打均勻。

B 滴入細胞懸液時(shí)蓋玻片下出現氣泡。

C 滴入懸液時(shí)的量太多,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。

三、、、、注意事項

A 本分離液是敏光型的,運輸和貯藏過(guò)程中在 18-25避光保存,啟封后 4保存本品只能用于科學(xué)研究,不能用于臨床檢測

避免微生物污染。本品為真空包裝,未啟封前于 10 以下易出現白色結晶,影響分離效果。

B 待分離的血液及組織樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在

20水浴箱中復溫 20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在 20±2時(shí)分離效果,且

所有操作過(guò)程一定要在無(wú)菌條件下進(jìn)行。

C 由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區溫度環(huán)境和四季差異,可能影響分離

效果,用戶(hù)可調節離心轉數及離心時(shí)間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗室自定)。

D 使用無(wú)靜電反應的離心管,推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。

E *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。注意在血液稀釋過(guò)程中應去除抗凝劑體積。

F 分離過(guò)程中所用其他試劑如:羥乙一基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液及

紅細胞裂解液等以我公司產(chǎn)品為*選擇,本公司相關(guān)系列產(chǎn)品無(wú)菌、無(wú)病毒、無(wú)支原體、

低內毒素水平且無(wú)細胞毒性,所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。

四、、、、 產(chǎn)品性能指標

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

內毒素 0.5...EU/ml

無(wú)菌 直接接種培養 14 天后培養基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下

五、、、、 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限

18-25避光保存,有效期兩年。啟封后置 4保存,有效期一周。

注::::若保證無(wú)微生物污染,啟封后可置 4長(cháng)期保存。但應注意保存溫度較低時(shí)本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。

 



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