細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定

產(chǎn)品型號：

所屬分類(lèi)：細胞生物學(xué)實(shí)驗

產(chǎn)品時(shí)間：2024-08-28

簡(jiǎn)要描述：提供商: 上海研謹生物
服務(wù)名稱(chēng): 細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定
規格: 細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定
價(jià)格： 300元
收費標準/服務(wù)周期/提供結果:
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細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定實(shí)驗目的：

掌握繪制細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的原理和方法。

細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定背景與原理：

生長(cháng)曲線(xiàn)是測定細胞生長(cháng)數的常用方法，也是判定細胞活力的重要指標，是培養細胞生物學(xué)特性的基本參數之一。--般細胞傳代之后，經(jīng)過(guò)短暫的懸浮后貼壁，隨后渡過(guò)長(cháng)短不同的潛伏期，即進(jìn)入快速生長(cháng)的指數生長(cháng)期。在細胞達到飽和密度后，停止生長(cháng)，進(jìn)入平臺期，然后退化衰亡。為了準確描述整個(gè)過(guò)程中細胞數目的動(dòng)態(tài)變化，需連續對細胞進(jìn)行計數。通常計數6天。為精確起見(jiàn)，一般每次實(shí)驗設3個(gè)平行重復。

[材料、試劑與儀器]

1、實(shí)驗材料:

Hela細胞系。

2、實(shí)驗試劑:

DMEM培養基(青霉素，鏈霉素，10%血清) ，0.25%胰蛋白酶溶液， 臺酚藍染液。

3、實(shí)驗儀器:

超凈工作臺，CO2培養箱，倒置顯微鏡，微量移液器，血細胞計數板，培養瓶，離心管,移液管，廢液缸，蓋玻片, 24孔板。

[方法與步驟]

1、取生長(cháng)良好的細胞，用培養基制成細胞懸液后計數。根據細胞計數結果按5x104/mL作傳代培養接種于24孔板中，共接種21孔細胞。1 m/孔。余下三孔可設傳代培養的對照。

2、24h后每天記錄細胞數目，每次取3孔細胞，分別進(jìn)行計數。計算平均值。連續計數7d。細胞用胰酶消化后加入一定量的培養基,混勻制成細胞懸液。取少量懸液與臺酚藍1:1混臺。取一干凈的血細胞計數板,蓋上蓋片，從蓋片兩邊滴入細胞懸液使之充滿(mǎn)計數板和蓋片之間。注意滴液勿有氣泡，也不能太多，否則會(huì )使蓋片浮起而使細胞計數不準。

3、低倍鏡下觀(guān)察，活細胞不著(zhù)色，臺盼藍著(zhù)色的細胞呈深藍色，是不健康或已死亡的細胞，不能計數。

找出計數板上的方格，計算四角大格內總細胞數，大格線(xiàn)者只計左側和上方，不計右側和下方細胞懸液中細胞

密度計算公式為:細胞數/mL= (四角大格內細胞數/4) x104x2

4、根據細胞計數結果，以單位細胞數(細胞數/mL)為縱坐標，以時(shí)間為橫坐標繪制生長(cháng)曲線(xiàn)。

實(shí)驗代做服務(wù)：