炭疽桿菌（BA）核酸試劑盒（熒光-PCR 法）

產(chǎn)品型號：

所屬分類(lèi)：動(dòng)物疾病類(lèi)ELISA快速檢測試劑盒

產(chǎn)品時(shí)間：2024-08-30

簡(jiǎn)要描述：炭疽桿菌（BA）核酸檢測試劑盒（熒光-PCR 法）公司提供實(shí)驗代做服務(wù)：PCR技術(shù)服務(wù)、細胞培養、染色技術(shù)服務(wù)、原位雜交技術(shù)服務(wù)、免疫沉淀技術(shù)服務(wù)、Western Blotting技術(shù)服務(wù)，并為廣大科研用戶(hù)提供各種高品質(zhì)的化學(xué)試劑、生物學(xué)試劑、免疫學(xué)檢測，ELISA試劑盒、生化試劑盒、分析標準品、對照品、標準物質(zhì)、食品安全檢測試劑、動(dòng)物疫病類(lèi)檢測產(chǎn)品、獸藥殘留檢測試劑、細胞培養服務(wù)等，應用覆蓋

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炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR 法)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】 將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應的反

通用名稱(chēng)：炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR 法)

應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

Name ：Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method) 4 擴增（核酸擴增區）

【包裝規格】48T/盒

【預期用途】

炭疽是由炭疽桿菌（Bacillus Anthracis, BA）感染引起的一種人獸共患病。BA 在環(huán)境中形成芽孢，可長(cháng)期、穩定地存在于自然界中。由于 BA 的穩定性及其致病性，易引發(fā)突發(fā)公共衛生事件。目前的 BA 檢測方法主要基于病原體的培養、染色鏡檢、血清學(xué)檢測等，但這些方法均不適合早期的快速偵檢?；诤怂釞z測的熒光-PCR技術(shù)，因其靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、特異性好，可快速檢測炭疽病原，及時(shí)控制炭疽疫

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3 推薦循環(huán)參數設置：

情 。

[1] 本試劑盒適用于檢測皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽桿菌，用于炭疽桿菌感染的輔助診斷。 5 結果分析判定

【檢驗原理】

6.1 結果分析條件設定

本試劑對炭疽桿菌特異性基因設計引物和熒光探針[2-3]，用熒光 PCR 技術(shù)對炭疽 設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動(dòng)分析的結果分析，當曲線(xiàn)出現桿菌的核酸進(jìn)行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

整體傾斜時(shí)，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調

節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線(xiàn)至高于陰性對照)，重新分析結果。

名 稱(chēng) 規 格

核酸提取液酶液

BA 反應液

BA 陽(yáng)性質(zhì)控品

陰性質(zhì)控品

注：

1.5mL×2 管

50μL×1 管

1.0mL×1 管

50μL×1 管

250μL×1 管

7結果判斷

陽(yáng)性：檢測通道 Ct 值≤35.0，丏曲線(xiàn)有明顯的指數增長(cháng)曲線(xiàn)。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，丏出現明顯擴增曲線(xiàn)的樣本建議重復試驗，重復試驗結果出現 Ct 值≤35.0 和明顯擴增曲線(xiàn)者為陽(yáng)性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結果無(wú) Ct 值丏無(wú)明顯的擴增曲線(xiàn)。

8 檢測方法的局限性

1） 不同批號試劑不能混用。 Ø 樣本檢測結果不樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2） 試劑盒內各試劑組份足夠包裝規格所標示的檢測次數。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融數不超過(guò) 5 次，有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列

Ø  樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染，會(huì )出現假陽(yáng)性結果；

Ø  陽(yáng)性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會(huì )導致假陽(yáng)性結果；

Ø  病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組，會(huì )導致假陰性結果；

Ø  不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì )導致假陰性結果；

Ø  試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定  量檢測不準確的結果；熒光定量 PCR 檢測儀。 Ø 本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【標本采集】

皮膚炭疽，取水泡液 1mL；肺炭疽，采集咽拭子標本，放入標本采集管中；腸炭疽，取糞便 1g

【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃，長(cháng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

【使用方法】

9. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：無(wú)明顯擴增曲線(xiàn)或無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴增曲線(xiàn)有明顯指數生長(cháng)期，丏 Ct 值≤32；

以上條件應同時(shí)滿(mǎn)足，否則實(shí)驗視為無(wú)效。

【注意事項】

Ø  所有操作嚴格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；

Ø 試劑盒內各種組分使用前應自然融化，*混勻并短暫離心；

Ø  反應液應避光保存；

1. . 樣品處理（樣本處理區） Ø 反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

1.1 1 樣本前處理

固體樣本：手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μ

L 于 1.5mL 滅菌離心管中；液體樣本：直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1 111 提取

1) 對上述處理好的標本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒溫處理 10min，13,000rpm 離心 5min，取上清液轉移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用深圳綠食源生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽(yáng)性對照；樣品每滿(mǎn) 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

Ø 使用一次性吸頭、一次性手套和各區與用工作服；

Ø 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進(jìn)行，以免交叉污染；

Ø 實(shí)驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

Ø  試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學(xué)實(shí)驗室生物安全通  則》進(jìn)行處理。

試劑 BA 反應液 酶液

用量（樣本數為 N）20μL

1μL將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，21uL/管。

3 加樣（樣本處理區）

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