酪蛋白酶譜MMP（3/10）檢測實(shí)驗

產(chǎn)品型號：

所屬分類(lèi)：分子生物學(xué)實(shí)驗

產(chǎn)品時(shí)間：2024-08-30

簡(jiǎn)要描述：[酪蛋白酶譜MMP（3/10）檢測實(shí)驗]慢病毒,腺病毒，RNAI類(lèi)， 分子生物實(shí)驗，病理實(shí)驗，免疫學(xué)實(shí)驗，細胞實(shí)驗，動(dòng)物實(shí)驗，蛋白組學(xué)實(shí)驗，芯片類(lèi)實(shí)驗，并為廣大客戶(hù)朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI. 核心期刊等服務(wù)。

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酪蛋白酶譜MMP（3/10）檢測實(shí)驗

實(shí)驗方法介紹

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)酪蛋白酶譜法(casein-zymography) 電泳分析試劑是一種旨在通過(guò)酪蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法，在分離、蛋白復性、底物水解、染色等系列步驟下，觀(guān)察并半定量深藍色背景中的白色清晰的基質(zhì)金屬蛋白酶條帶,根據分子量確定特異基質(zhì)金屬蛋白酶及其活性的權wei而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗證明的。其適用于各種細胞裂解萃取樣品(動(dòng)物、人體、植物、昆蟲(chóng)等)、培養 上清懸液、血清和關(guān)節滑液或腦脊液等基質(zhì)金屬蛋白酶- 1, 3,7以及12等活性及其抑制劑的檢測。

實(shí)驗技術(shù)背景

基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases; MMPs) 是類(lèi)結構高度同源的分泌型或膜相關(guān)性鋅內肽酶的總稱(chēng)，因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。迄今為止發(fā)現的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細胞外基質(zhì)(xtracellular matrix)成分，同時(shí)參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、 組織再吸收(tissue resorption)、 疾病發(fā)生，例如關(guān)節炎、癌細胞浸入轉移等根據降解的底物不同可將MMPs分為4大類(lèi):

(1)膠原酶: MMP1、MMP8、MMP13 主要消化I、II、 II、 VII、 X型膠原和蛋白多糖;

(2)明膠酶(IV型膠原酶) : MMP2、MMP9,又稱(chēng)明膠酶A、B, 主要消化IV、V. VII、 X型膠原和彈性纖維;

(3)基質(zhì)溶解素: MMP3、MMP7、MMP16、MMP11,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、II、IV、V. VII、IX膠原及MMP1、 MMP8、 MMP9;

(4)膜型金屬蛋白酶: MT1-MMP、 MT2-MMP、 MT3-MMP，主要作用于明膠、IV型膠原、MMP2。體內絕大多數細胞并不儲備MMPs，當需要MMPs的信號傳遞到細胞后才臨時(shí)合成，合成的MMPs 以無(wú)活性的酶原(proenzyme) 形式分泌到細胞外，隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活，一種激活的MMPs可激活另一種MMPs, 形成瀑布效應。酪蛋白酶譜法(casein-zymography) 電泳分析技術(shù)使用-酪蛋白作為酶的底物，具有簡(jiǎn)便,無(wú)需抗體，同步觀(guān)察多種酶以及活化與否的優(yōu)勢。

研謹生物酪蛋白酶譜法MMP3/10檢測實(shí)驗服務(wù)案例介紹

本實(shí)驗采用酶譜法(zymography)檢測MMP-3、MMP-7、 MMP-10活性，Zymography是一種基于SDS-PAGE電泳的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達1 nM (10~100 pg),高于ELISA方法。通過(guò)制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠，含蛋白酶的樣品在凝膠進(jìn)行電泳，電泳結束后取出凝膠與酶反應Bufer孵育,凝膠進(jìn)行考馬斯亮藍染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區域,從而能同時(shí)指示MMP-3/10的大小位置(酶譜)及活性。

樣品準備要求

1)血漿/血清/上清或體液樣品準備:血漿或血清樣本加入1/10體積的檸檬酸鈉，1000rpm離心20分鐘， 留取上清，以BCA法測定蛋白濃度，測定濃度以后，取約30ug蛋白上樣進(jìn)行電泳檢測。樣本準備后可暫時(shí)4°C保存，不立即測定的樣品需 -70°C保存,但不宜超過(guò)10天。

2)組織樣本準備:取100mg新鮮組織以2m勻漿液進(jìn)行勻漿(勻漿劑: 0.1M Tris/ HCI/pH 7.4 ,0.5%TritonX-100, 0. 1mg/ml PMSF)，12000g 4°C離心5分鐘，移取上清層至另一新的1m離心管待測，取30ug蛋白上樣進(jìn)行電泳檢測。樣本準備以后，樣品可暫時(shí)4°C保存,不立即測定的樣品需 -70°C保存,但不宜超過(guò)10天。

3)細胞樣本準備:取1個(gè)6孔板細胞(每孔 細胞量約2*106個(gè)細胞)， 離心后以500u勻漿液進(jìn)行超聲勻漿(勻漿劑: 0.1M Tris/HClpH 7. 4 ,0.5% TritonX-100，0.1mg/ml PMSF)，12000g 4°C離心5分鐘，移取上清層至另一新的1m離心管待測，取30ug蛋白 上樣進(jìn)行電泳檢測。樣本準備以后，樣品可暫時(shí)4°C保存，不立即測定的樣品需-70°C保存，但不宜超過(guò)10天。

實(shí)驗須知

1)實(shí)驗用試劑由實(shí)驗室免費提供;

2)檢測系統含陽(yáng)性參照或內參;

3)提供原始膠片;

4)實(shí)驗委托方只需提供檢測樣品。

實(shí)驗代做服務(wù)：