斑點(diǎn)雜交實(shí)驗服務(wù)

產(chǎn)品型號：

所屬分類(lèi)：分子生物學(xué)實(shí)驗

產(chǎn)品時(shí)間：2024-08-30

簡(jiǎn)要描述：斑點(diǎn)雜交實(shí)驗服務(wù)，慢病毒,腺病毒，RNAI類(lèi)， 分子生物實(shí)驗，病理實(shí)驗，免疫學(xué)實(shí)驗，細胞實(shí)驗，動(dòng)物實(shí)驗，蛋白組學(xué)實(shí)驗，芯片類(lèi)實(shí)驗，并為廣大客戶(hù)朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI. 核心期刊等服務(wù)。

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斑點(diǎn)雜交實(shí)驗服務(wù)

實(shí)驗技術(shù)簡(jiǎn)介:斑點(diǎn)雜交(Dotblot) 是將被檢標本點(diǎn)到膜上，烘烤固定。這種方法耗時(shí)短，可做半定量分析。- 張膜上可同時(shí)檢測多個(gè)樣品，為使點(diǎn)樣準確方便，市售有多種多管吸印儀(Manifold) , 如MinifoldI和II. Smart Botter(Wealtec).Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot,它們有許多孔，樣品加到孔中，在負壓下就會(huì )流到膜上呈斑點(diǎn)狀或狹縫狀。反復沖洗進(jìn)樣孔，取出膜烤干或紫外線(xiàn)照射以固定標本，這時(shí)的膜就可以進(jìn)行雜交。

實(shí)驗技術(shù)原理:

斑點(diǎn)雜交是指將待測的DNA變性后點(diǎn)加在硝酸纖維素膜(或尼龍膜、NC膜)上, 用已標記的探針進(jìn)行雜交，洗膜(除去未接合的探針)， 放射自顯影，判斷是否有雜交及其雜交強度，主要用于基因缺失或拷貝數改變的檢測。

實(shí)驗操作流程:

1. DNA斑點(diǎn)雜交

①先將膜在水中浸濕，再放到15*SSC中。

②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min,冰中速冷。

③用鉛筆在濾膜上標好位置將DNA點(diǎn)樣于膜上，每個(gè)樣品-般點(diǎn)5ul(2~10μg DNA)。

④將膜烘干，密封保存備用。

2、RNA斑點(diǎn)雜交

與上法類(lèi)似、，每個(gè)樣品至多加10μg總RNA (經(jīng)酚/氨0仿或異硫青酸胍提取純化)。 方法是將RNA溶于5μl DEPC水，加5μI甲醛/SSC緩沖液(10*SSC中含6.15moI/L甲醛) ，使RNA變性，然后取5-8μI點(diǎn)樣于處理好的濾膜上，烘干。

3、完整細胞斑點(diǎn)雜交

應用類(lèi)似檢測細菌菌落的方法，可以對細胞培養物的特異序列進(jìn)行快速檢測，將整個(gè)細胞點(diǎn)到膜上，經(jīng)NaOH處理，使DNA暴露、變性和固定，再按常規方法進(jìn)行雜交與檢測。有人曾用此法從105個(gè)培養細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點(diǎn)印跡法可以用于篩選大量標本，因為它使細胞直接在膜上溶解，所以DNA含量甚至比常用的提取法還高，又不影響與32P標記的探針雜交，但它不適用于非放射性標記探針，因為DNA純度不夠，會(huì )產(chǎn)生高本底。

實(shí)驗注意事項:

客戶(hù)提供:

TotalRNA (DNA) ≥20ug,濃度> 1ug/ul, A260/A280>1.8;提供標記后的探針，需同時(shí)告知標記后探針的濃度及活性，待

檢測目的基因的Genbank序列號。

交付標準:

1、圖片

2.完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數據分析、實(shí)驗結果)

其他:

1.點(diǎn)樣量不要太大，否則雜交后，X光片上點(diǎn)太大，互相影響。

點(diǎn)樣前尼龍膜無(wú)需預處理，點(diǎn)樣后自然晾干后， 分別在變性液和中和液中進(jìn)行變性和中和。

收費標準/服務(wù)周期/提供結果:

歡迎咨詢(xún)詳談，我們會(huì )根據您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。

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