實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗服務(wù)

產(chǎn)品型號：

所屬分類(lèi)：分子生物學(xué)實(shí)驗

產(chǎn)品時(shí)間：2024-08-30

簡(jiǎn)要描述：實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗服務(wù)
[平臺項目開(kāi)展范圍]慢病毒,腺病毒，RNAI類(lèi)， 分子生物實(shí)驗，病理實(shí)驗，免疫學(xué)實(shí)驗，細胞實(shí)驗，動(dòng)物實(shí)驗，蛋白組學(xué)實(shí)驗，芯片類(lèi)實(shí)驗，并為廣大客戶(hù)朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI. 核心期刊等服務(wù)。

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實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗服務(wù)

提供快捷高效的實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real TIme PCR,RT PCR)服務(wù)，所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。是一個(gè)常用的mRNA水平的基因表達定量技術(shù)。

服務(wù)內容

細胞組織的基因差異表達檢測，經(jīng)過(guò)不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、 化學(xué)處理等)，特定基因在不同時(shí)段的表達差異以及cDNA芯片或差顯結果的確證。

組織/細胞樣品中基因拷貝數的確定，DNA或RNA的相對和定量分析。包括病原微生物或病毒含量的檢測，轉基因動(dòng)植物轉基因拷貝數的檢測，RNAI基因失活率的檢測等?；蚍中?，基因突變及多態(tài)性方面的研究。

技術(shù)原理

Real-time PCR技術(shù)，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實(shí)時(shí)檢測PCR擴增反應中每一個(gè)循環(huán)擴 增產(chǎn)物量的變化，通過(guò)Ct值和標準曲線(xiàn)的分析對起始模板進(jìn)行定量分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)具有特異性強，有效解決了PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，做到PCR每循環(huán)一次就收集一個(gè)數據，建立實(shí)時(shí)擴增曲線(xiàn)，準確地確定Ct值，從而根據Ct值確定起始DNA拷貝數。做到了真正意義上的DNA定量。

技術(shù)流程

一、RNA的提取

二、DNase I消化樣品RNA中的DNA

三、RNA瓊脂糖凝膠電泳

四、RNA反轉錄為cDNA

Real-Time PCR弓物設計的要求

①Tm=55~65 °C

②GC=30~80%

③PCR擴增產(chǎn)物長(cháng)度:引物的產(chǎn)物大小不要太大，一般在80~300 bp之間都可。

④引物的退火溫度要高，-般要在60 °C以上。

五、cDNA與引物質(zhì)量檢測

選擇特異性好。擴增效率高的引物作為實(shí)時(shí)熒光使用引物。

六利用相對定量的方法分析目的基因表達量的情況:

常用的看家基因有B-actin, GAPDH, 188 rRNA

七、定量PCR檢測

八擴增曲線(xiàn)和溶解曲線(xiàn)

溶解曲線(xiàn)全部為單峰表明為特異性擴增，熒光擴增曲線(xiàn)可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號階段，熒光信號指數擴增階段和平臺期。

收費標準/服務(wù)周期/提供結果:

歡迎咨詢(xún)詳談，我們會(huì )根據您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。

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