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021-65232515
產(chǎn)品型號:
所屬分類(lèi):免疫學(xué)實(shí)驗
產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-30
簡(jiǎn)要描述:RNA Pulldown、DNA Pull-down收費標準/服務(wù)周期/提供結果:歡迎咨詢(xún)詳談,我們會(huì )根據您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。更多實(shí)驗技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內容,或來(lái)電詳詢(xún)!
RNA Pulldown、DNA Pull-down
實(shí)驗意義:
核酸與蛋白質(zhì)的互作是細胞功能的核心,包括蛋白質(zhì)合成、mRNA組裝等生命活動(dòng)中重要的代謝過(guò)程,研究核酸與蛋白質(zhì)的互作是研究生命科學(xué)的基本工具。
實(shí)驗原理及步驟
RNA Pull-down:通過(guò)體外轉錄RNA并用生物素進(jìn)行標記,然后與胞漿蛋白混合物共同孵育形成RNA-蛋白質(zhì)復合物,然后用鏈委親和素標記的磁珠分離純化該復合物(利用生物素與鏈霉親和素的非共價(jià)親和作用)。洗脫后進(jìn)行檢測,如果檢測蛋白為已知蛋白可通過(guò)WB進(jìn)行鑒定,如果檢測未知蛋白則可以結合質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。流程為提取細胞胞漿蛋白樣品液- -體外轉錄合成生物素標記RNA-共孵育_ -磁珠純化- -洗脫得到互作蛋白. -WB或質(zhì)譜鑒定。
DNA Pull-down:通過(guò)合成標記有生物素的DNA+*片段,與細胞核蛋白混合物共同孵育形成DNA-蛋白質(zhì)復合物,然后用鏈垂親和素磁珠純化,WB或者質(zhì)譜進(jìn)行檢測鑒定。流程為提取核蛋白樣品液- -合成生物素標記DNA-共孵育- -磁珠純化- ~洗脫得到互作蛋白- -WB或質(zhì)譜鑒定。
結果展示
RNA Pull-down
DNA Pull-down .
實(shí)驗周期及交付標準
1.實(shí)驗周期: 1-2個(gè)月
2.交付標準:
RNA Pull-down:探針序列、X光片.實(shí)驗報告(實(shí)驗步驟、試劑、儀器等)
DNA Pull-down:探針序列、X光片.實(shí)驗報告(實(shí)驗步驟.試劑、儀器等)
需確認信息
1.目的基因種屬及ID號
2.基因序列信息
3.樣本種屬及類(lèi)型
4.樣本數量.
5.分析要求
參考文獻
[1]Chen R,Liu Y,Zhuang H,et al. Quantitative proteomics reveals that long non-coding RNA MAL AT1 interacts withDBC1 to regulate p53 acetylation[J]. Nucleic Acids Research, 2017, 45(17):9947-9959.
[2]Tran D H , Shishido Y,Chung S P , et al. lnentication of DNA-binding proteins that interact with the 5-f1anking regionof the human D-amino acid oxidase gene by pull-down assay coupled with two-dimensional gel electrophoresis andmass spectrometry[J]. Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis, 2015, 116:94-100.
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