您好,歡迎來(lái)到上海研謹生物科技有限公司!
13585717991
021-65232515
產(chǎn)品型號:
所屬分類(lèi):免疫學(xué)實(shí)驗
產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-30
簡(jiǎn)要描述:?jiǎn)慰寺】贵w制備服務(wù)收費標準/服務(wù)周期/提供結果:歡迎咨詢(xún)詳談,我們會(huì )根據您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。更多實(shí)驗技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內容,或來(lái)電詳詢(xún)!
提供商: 上海研謹生物
服務(wù)名稱(chēng): 單克隆抗體制備服務(wù)
規格: 實(shí)驗服務(wù)
單克隆抗體(MAb)是針專(zhuān)- -的抗原決定簇產(chǎn)生的抗體,單克隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)起源于1975年,由G. KOhler和Milstein創(chuàng )立。主要原理是利用產(chǎn)生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞,生產(chǎn)抗體。
雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗是針對體的主要步驟包括:
(1 )抗原制備,
(2)免疫動(dòng)物,
(3)免疫脾細胞和骨髓瘤細胞的制備,
(4)細胞融合;
(5)雜交瘤細胞的選擇培養,
(6)雜交瘤細胞的篩選;
(7)雜交瘤細胞的克隆化;
(8)單克隆抗體的檢定;
(9)分泌單克隆抗體雜交瘤細胞系的建立:
(10)單克隆抗體的大量制備。
下面簡(jiǎn)要介紹單克隆抗體的制備過(guò)程:
1、免疫動(dòng)物免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細胞的過(guò)程。一般選用6- 8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射??乖ㄟ^(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。
2、細胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠,無(wú)菌操作取出脾臟,在平皿內擠壓研磨,制備脾細胞懸液。將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合, 并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作下,各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細胞。
3、選擇性培養選擇性培養的目的是篩選融臺的雜交瘤細胞,一般采用HAT選擇性培養基。 在HAT培養基中,未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉移酶,不能利用補救途徑合成DNA而死亡。未融臺的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉移酶,但其本身不能在體外長(cháng)期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得 了次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉移酶,并具有骨髓瘤細胞能無(wú)限增殖的特性,因此能在HAT培養基中存活和增殖。
4、雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選與克隆化在HAT培養基中生長(cháng)的雜交瘤細胞,只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞,因此,必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細胞的克隆化培養。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法,篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細胞,并進(jìn)行克隆擴增。
經(jīng)過(guò)全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類(lèi)型、亞類(lèi)、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子后,及時(shí)進(jìn)行凍存。
5、單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制備重要采用動(dòng)物體內誘生法和體外培養法。
(1)體內誘生法取Balb/c小鼠,首先腹腔注射0. 5ml液體石臘或降植烷進(jìn)行預處理。1-2周后,腹腔內接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖,并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周,可見(jiàn)小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可獲得大量單克隆抗體。
(2)體外培養法將雜交瘤細胞置于培養瓶中進(jìn)行培養。在培養過(guò)程中,雜交瘤細胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,收集培養上清液,離心去除細胞及其碎片,即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。近年來(lái),各種新型培養技術(shù)和裝置不斷出現,大大提高了抗體的生產(chǎn)量。雜交瘤細胞融合后,要進(jìn)行篩選后才能使用。雜交瘤細胞分為兩次:一、篩選出雜交瘤細胞;二、 在初選的雜交瘤細胞中篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞,這兩次篩選的方法和原理各不相同。
實(shí)驗代做服務(wù):
ELISA試劑盒免費代檢測 | CCK8檢測 | 基因組DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
Western Blot | 免疫組化 | 熒光定量PCR | 動(dòng)物模型服務(wù) |
流式細胞檢測 | ROS氧化分析 | 激光共聚焦 | DNA甲基化實(shí)驗 |
細胞劃痕 | 鈣離子濃度檢測 | 掃描電鏡實(shí)驗 | microRNA測序 |
動(dòng)物實(shí)驗 | 探針合成 | ATP/ADP檢測 | 石蠟/冰凍切片 |
定點(diǎn)突變 | 線(xiàn)粒體膜電位(MMP)檢測 | 細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定 | 藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗
|
免疫共沉淀 | 真核表達載體構建 | 染色質(zhì)免疫沉淀CHIP | 非標定量(Label-free)實(shí)驗 |