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021-65232515
產(chǎn)品型號:
所屬分類(lèi):病理學(xué)檢測實(shí)驗
產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-30
簡(jiǎn)要描述:提供商: 上海研謹生物服務(wù)名稱(chēng): 核仁組成區嗜銀-AGNOR染色規格: 樣本
核仁組成區嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗服務(wù)
一.核仁組成區嗜銀(AGNOR)染色簡(jiǎn)介
核仁組成區(NORs)是染色體上的一個(gè)編碼核糖體RNA(rRNA)的片段,存在于DNA特異性環(huán)上,凸向核仁。在電鏡下,核仁組成區為在電子致密區中的境界不清的淺染區域。在石蠟切片上,在核仁中見(jiàn)到的每一個(gè)點(diǎn)狀反應顆粒有可能代表多 個(gè)AgNOR位點(diǎn)。核仁組成區嗜銀蛋白染色主要特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、批量染色的較為經(jīng)濟, AgNOR位點(diǎn)的數量增加與細胞增殖性增加有關(guān),對于良惡性腫瘤的鑒別具有一定的意義。
二、試劑配制
1. AgNOR染色液
甲液:明膠2 g溶于雙蒸水至99 ml,在60°C使之*溶解,再加入純甲酸1 ml搖勻待用。
乙液: AgNO350 g溶解于雙蒸水中至100 ml, 4°C冰箱保存。
2. AgNOR工作液
取甲液10 ml,乙液20 ml臨用前混合。
三、染色步驟
1.切片脫蠟至水
2.雙蒸水洗2次
3.AgNOR工作液中(25°C) 浸染30分鐘(暗處進(jìn)行) (鏡下觀(guān)察)
4.脫水,透明,封固
5結果:油鏡觀(guān)察,細胞核及胞質(zhì)背暴為淡黃色,AgNOR呈棕黑色顆粒狀。
四、樣本說(shuō)明
1、 石蠟切片
取材: 1.組織離體后需及時(shí)固定; 2.組織標本不宜過(guò)大、過(guò)厚。
固定: 1.固定液: 10%福爾馬林(4%Paraformaldehyde) 或10%中性甲醛: 2.用量: -般固定液的量與組織體積比為
10:1~20:1; 3. 固定:適宜的固定時(shí)間,主要根據材料的大小松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片經(jīng)60°C烤片3-5小時(shí)后,可于常溫或4°C干燥保存。
2.冰凍切片
取材:取材后需立即置于超低溫冰箱或液氮中保存。
固定:樣本冰凍切片后,應立即放入甲醇、acetone. 95%酒精、 4%Paraformaldehyde等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然風(fēng)干,密封后置于-80°C. -20°C保存, 盡快用于后續實(shí)驗。
3.細胞塊石蠟切片
細胞量較多的樣品,可離心分離所需細胞,用中性甲醛固定后制作成瓊脂細胞塊,然后按照制作石蠟切片的操作流程進(jìn)行切
片。
4、細胞爬片
在孔板里做的細胞爬片,爬片取出后,用PBS洗滌2次(根據研究目的,PBS洗滌可選擇不做)。用4%Paraformaldehyde49C固定15分鐘,將表面液體吹干,置于-20°C保存。若在短時(shí)間內即開(kāi)展實(shí)驗,可在加固定液后,于4°C冰箱中放置一段時(shí)間。
5.細胞涂片細胞涂片常用的固定液有95%酒精(常用)、酒精 Glacial acetic acid solution. Ethyl ether-酒精液和
Carney's液等。
五、注意事項
1.常用的固定液為中性甲醛和4%Paraformaldehyde, 能使大多數抗原保存良好,適用于免疫組織化學(xué)。
2.病理實(shí)驗切片zui好是防脫片,以免實(shí)驗過(guò)程中出現掉片。若客戶(hù)提供切片,應告知切片有無(wú)防脫處理。
3.骨組織、皮膚組織或脂肪含量較高的樣本,實(shí)驗過(guò)程中有較高的掉片幾率。
4.客戶(hù)可提供組織塊(以10%福爾馬林、4%Paraformaldehyde或10%中性甲醛固定, 如組織塊極小請事先說(shuō)明) . 蠟塊
或切片(使用免疫組化切片,以避免實(shí)驗過(guò)程中掉片)
5.待檢測蛋白的種屬、實(shí)驗分組情況及實(shí)驗背景資料、其他具體要求等需事先說(shuō)明。
6.若客戶(hù)提供骨組織或鈣化程度較高的組織進(jìn)行實(shí)驗,需進(jìn)行脫鈣處理。
7.浸泡在固定液中的組織樣本,在運輸中容器需密封,防止破碎、滲漏。
實(shí)驗代做服務(wù):
ELISA試劑盒免費代檢測 | CCK8檢測 | 基因組DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
Western Blot | 免疫組化 | 熒光定量PCR | 動(dòng)物模型服務(wù) |
流式細胞檢測 | ROS氧化分析 | 激光共聚焦 | DNA甲基化實(shí)驗 |
細胞劃痕 | 鈣離子濃度檢測 | 掃描電鏡實(shí)驗 | microRNA測序 |
動(dòng)物實(shí)驗 | 探針合成 | ATP/ADP檢測 | 石蠟/冰凍切片 |
定點(diǎn)突變 | 線(xiàn)粒體膜電位(MMP)檢測 | 細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定 | 藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗
|
免疫共沉淀 | 真核表達載體構建 | 染色質(zhì)免疫沉淀CHIP | 非標定量(Label-free)實(shí)驗 |