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021-65232515
產(chǎn)品型號:
所屬分類(lèi):蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗
產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-18
簡(jiǎn)要描述:提供商:上海研謹生物服務(wù)名稱(chēng):蛋白質(zhì)純化實(shí)驗服務(wù)規格:實(shí)驗服務(wù)周期:4-6周價(jià)格: 500元收費標準/服務(wù)周期/提供結果:歡迎咨詢(xún)詳談,我們會(huì )根據您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。更多實(shí)驗技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內容,或來(lái)電詳詢(xún)!
蛋白質(zhì)純化實(shí)驗服務(wù)
蛋白質(zhì)純化簡(jiǎn)介:
蛋白純化要利用不同蛋白間內在的相似性與差異,利用各種蛋白間的相似性來(lái)除去非蛋白物質(zhì)的污染,而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來(lái)。每種蛋白間的大小形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì )有差異,利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來(lái)得到重組蛋白。
蛋白質(zhì)純化的實(shí)驗方法:
蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段二個(gè)階段。一般蛋白純化采用的方法為樹(shù)脂法。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如DNA、RNA等分開(kāi),由于此時(shí)樣本體積大.成分雜,要求所用的樹(shù)脂高容量、高流速、顆粒大、粒徑分布寬.并可以迅速將蛋白與污染物分開(kāi),必要時(shí)可加入相應的保護劑(例如蛋白酶抑制劑)。防止目的蛋白被降解。精細純化階段則需要更高的分辨率,此階段是要把目的蛋白與那些分子量大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區分開(kāi)來(lái),要用更小的樹(shù)脂顆粒以提高分辨率,常用離子交換柱和疏水柱,應用時(shí)要綜合考慮樹(shù)脂的選擇性和柱效兩個(gè)因素。選擇性指樹(shù)脂與目的蛋白結
合的特異性,柱效則是指各蛋白成分逐個(gè)從樹(shù)脂上集中洗脫的能力,洗脫峰越窄,柱效越好。僅有好的選擇性,洗脫峰太寬,蛋白照樣不能有效分離。
蛋白的表達:
是指通過(guò)模式生物來(lái)表達目的的外源基因蛋白的一種現代分子生物學(xué)技術(shù),表達系統主要是由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成,從而實(shí)現外源基因通過(guò)載體在宿主中的表達。
實(shí)驗意義:
1.蛋白表達技術(shù)在基因工程技術(shù)中占有核心地位,在實(shí)際生產(chǎn)中具有重要的應用意義。
2.蛋白表達技術(shù)已經(jīng)廣泛應用于生物學(xué)各個(gè)具體領(lǐng)域,特別是體內的功能研究和蛋白質(zhì)的大規模生產(chǎn)都需要應用。
實(shí)驗原理:
1.獲得目的基因;
2.構建合適的載體(注意根據目的基因和純化方式的選擇等多方面因素選擇融合標簽) ;
3.將目的基因插入表達載體中。并通過(guò)測序進(jìn)行驗證:
4.載體轉化進(jìn)入大腸桿菌等宿主菌后,測序篩選挑單克隆菌落進(jìn)行擴大培養,IPTG誘導靶蛋白的表達;
5.破碎菌體后提取蛋白。并通過(guò)融合標簽純化得到靶蛋白。
分類(lèi):
1.真核表達系統:真核表達系統主要有昆蟲(chóng)表達系統、酵母表達系統和哺乳動(dòng)物細胞表達,其中酵母表達和哺乳動(dòng)物細胞較為常見(jiàn)。
2.無(wú)細胞體外表達系統,又稱(chēng)為體外翻譯系統,通過(guò)模擬細胞的生命活動(dòng)和現象來(lái)重現胞內蛋白的轉錄和翻譯過(guò)程。
結果展示:
原核表達系統
真核表達系統
無(wú)細胞體外表達系統
Reaction temperature (C)
實(shí)驗周期及交付標準:
1.實(shí)驗周期: 4-6周
2.交付標準:目的蛋白、實(shí)驗報告(試劑、 耗材、實(shí)驗步驟)、原始數據等。
需確認的信息:
1.表達系統采取方式。
2.純化步驟選擇。
實(shí)驗代做服務(wù):
ELISA試劑盒免費代檢測 | CCK8檢測 | 基因組DNA提取 | 蛋白相互作用分析 |
Western Blot | 免疫組化 | 熒光定量PCR | 動(dòng)物模型服務(wù) |
流式細胞檢測 | ROS氧化分析 | 激光共聚焦 | DNA甲基化實(shí)驗 |
細胞劃痕 | 鈣離子濃度檢測 | 掃描電鏡實(shí)驗 | microRNA測序 |
動(dòng)物實(shí)驗 | 探針合成 | ATP/ADP檢測 | 石蠟/冰凍切片 |
定點(diǎn)突變 | 線(xiàn)粒體膜電位(MMP)檢測 | 細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定 | 藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗 |
免疫共沉淀 | 真核表達載體構建 | 染色質(zhì)免疫沉淀CHIP | 非標定量(Label-free)實(shí)驗 |