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蛋白質(zhì)純化實(shí)驗服務(wù)

蛋白質(zhì)純化實(shí)驗服務(wù)

產(chǎn)品型號:

所屬分類(lèi):蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗

產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-18

簡(jiǎn)要描述:提供商:上海研謹生物
服務(wù)名稱(chēng):蛋白質(zhì)純化實(shí)驗服務(wù)
規格:實(shí)驗服務(wù)
周期:4-6周
價(jià)格: 500元
收費標準/服務(wù)周期/提供結果:
歡迎咨詢(xún)詳談,我們會(huì )根據您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
更多實(shí)驗技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內容,或來(lái)電詳詢(xún)!

詳細說(shuō)明:

蛋白質(zhì)純化實(shí)驗服務(wù)

蛋白質(zhì)純化簡(jiǎn)介:

蛋白純化要利用不同蛋白間內在的相似性與差異,利用各種蛋白間的相似性來(lái)除去非蛋白物質(zhì)的污染,而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來(lái)。每種蛋白間的大小形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì )有差異,利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來(lái)得到重組蛋白。

蛋白質(zhì)純化的實(shí)驗方法:

蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段二個(gè)階段。般蛋白純化采用的方法為樹(shù)脂法。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如DNA、RNA等分開(kāi),由于此時(shí)樣本體積大.成分雜,要求所用的樹(shù)脂高容量、高流速、顆粒大、粒徑分布寬.并可以迅速將蛋白與污染物分開(kāi),必要時(shí)可加入相應的保護劑(例如蛋白酶抑制劑)。防止目的蛋白被降解。精細純化階段則需要更高的分辨率,此階段是要把目的蛋白與那些分子量大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區分開(kāi)來(lái),要用更小的樹(shù)脂顆粒以提高分辨率,常用離子交換柱和疏水柱,應用時(shí)要綜合考慮樹(shù)脂的選擇性和柱效兩個(gè)因素。選擇性指樹(shù)脂與目的蛋白結

的特異性,柱效則是指各蛋白成分逐個(gè)從樹(shù)脂上集中洗脫的能力,洗脫峰越窄,柱效越好。僅有好的選擇性,洗脫峰太寬,蛋白照樣不能有效分離。

蛋白的表達:

是指通過(guò)模式生物來(lái)表達目的的外源基因蛋白的一種現代分子生物學(xué)技術(shù),表達系統主要是由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成,從而實(shí)現外源基因通過(guò)載體在宿主中的表達。

實(shí)驗意義:

1.蛋白表達技術(shù)在基因工程技術(shù)中占有核心地位,在實(shí)際生產(chǎn)中具有重要的應用意義。

2.蛋白表達技術(shù)已經(jīng)廣泛應用于生物學(xué)各個(gè)具體領(lǐng)域,特別是體內的功能研究和蛋白質(zhì)的大規模生產(chǎn)都需要應用。

實(shí)驗原理:

1.獲得目的基因;

2.構建合適的載體(注意根據目的基因和純化方式的選擇等多方面因素選擇融合標簽) ;

3.將目的基因插入表達載體中。并通過(guò)測序進(jìn)行驗證:

4.載體轉化進(jìn)入大腸桿菌等宿主菌后,測序篩選挑單克隆菌落進(jìn)行擴大培養,IPTG誘導靶蛋白的表達;

5.破碎菌體后提取蛋白。并通過(guò)融合標簽純化得到靶蛋白。

分類(lèi):

1.真核表達系統:真核表達系統主要有昆蟲(chóng)表達系統、酵母表達系統和哺乳動(dòng)物細胞表達,其中酵母表達和哺乳動(dòng)物細胞較為常見(jiàn)。

2.無(wú)細胞體外表達系統,又稱(chēng)為體外翻譯系統,通過(guò)模擬細胞的生命活動(dòng)和現象來(lái)重現胞內蛋白的轉錄和翻譯過(guò)程。

結果展示:

原核表達系統

真核表達系統



無(wú)細胞體外表達系統

Reaction temperature (C)

實(shí)驗周期及交付標準:

1.實(shí)驗周期: 4-6周

2.交付標準:目的蛋白、實(shí)驗報告(試劑、 耗材、實(shí)驗步驟)、原始數據等。

需確認的信息:

1.表達系統采取方式。

2.純化步驟選擇。


實(shí)驗代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取


蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實(shí)驗

microRNA測序

動(dòng)物實(shí)驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線(xiàn)粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗


免疫共沉淀

真核表達載體構建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實(shí)驗




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