豚鼠臟器組織白細胞分離液試劑盒說(shuō)明書(shū)

（細胞培養及分子生物學(xué)）

【產(chǎn)品規格】

200ml/Kit

貨號：WBC1085P

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶(hù)使用，試劑內容如下：

全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

• 首先制備組織單細胞懸液，制備方法詳見(jiàn)“組織單細胞懸液制備技術(shù)”。

• 取一支 15ml 離心管，加入與制備的組織單細胞懸液等量的分離液（注：分離液zui少不得少于 5ml）。

• 用吸管小心吸取制備的組織單細胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min。（注：根據組織單細胞懸液樣本量確定離心條件，組織單細胞懸液量越大，離心力越大，離心時(shí)間越長(cháng)，具體離心條件需客戶(hù)自行摸索，以達到*分離效果）。

• 離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細胞層（一層或兩層），加入 10 ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。250g，離心 10min。重復洗滌 2-3 次，即得所需白細胞。

• 如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）裂解紅細胞，具體操作方法詳見(jiàn)“紅細胞裂解液使用說(shuō)明”。

【注意事項】

• 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實(shí)驗結果，在取樣 2h 內進(jìn)行實(shí)驗，樣品存放時(shí)間越長(cháng)，細胞分離效果越差。樣品放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

• 本實(shí)驗不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì )變成毛面，影響細胞分離效果。

• 分離液用量大于制備的組織單細胞懸液樣本時(shí)，分離效果更佳。

• 如實(shí)驗后細胞得率或活性過(guò)低，請上海研謹技術(shù)以尋求幫助。

【儲存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗白細胞提取率及純度大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶(hù)可適當進(jìn)行參考。

【相關(guān)實(shí)驗技術(shù)方案】

1. 組織單細胞懸液制備技術(shù)

• 所獲得白細胞的培養技術(shù)。

• 所獲得白細胞的核酸提取技術(shù)。

• 所獲得白細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)
• B.免疫組化技術(shù)
• C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

注：上述技術(shù)方案詳情請登陸本公司搜索“細胞分離、

純化、擴增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”，并在說(shuō)明書(shū)項目欄下下載使用。

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：

• 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區客戶(hù)可根據當地情況對離心條件進(jìn)行適當調整。建議對離心條件進(jìn)行調整時(shí)，恒定離心時(shí)間，對離心轉速進(jìn)行調整。

• 本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同，可

能出現紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉速。

注：在對離心條件進(jìn)行調整時(shí)，離心轉速的加減以 50-100g 為基數，直至達到*分離效果，

離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準。