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狗臟器組織白細胞分離液試劑盒

狗臟器組織白細胞分離液試劑盒

產(chǎn)品型號: WBC1079P

所屬分類(lèi):分離液試劑盒

產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-27

簡(jiǎn)要描述:名稱(chēng)產(chǎn)品編號規格
A各種動(dòng)物外周血白細胞分離液詳見(jiàn)附錄12×100ml
B紅細胞裂解液(贈品)NH4CL2009100ml
C全血及組織稀釋液(贈品)2010C1119100ml
D細胞洗滌液(贈品)2010X1118100ml
本產(chǎn)品用于:分離狗臟器組織白細胞
注:本試劑內容中各單品可根據貨號單獨購買(mǎi),客戶(hù)可根據實(shí)際使用情況自行選擇購買(mǎi)。

詳細說(shuō)明:

 

產(chǎn)品名稱(chēng):狗臟器組織白細胞分離液試劑盒

(細胞培養及分子生物學(xué))說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶(hù)使用,試劑內容如下:

 名稱(chēng) 產(chǎn)品編號 規格

A 各種動(dòng)物外周血白細胞分離液 詳見(jiàn)附錄 1 2×100ml

B 紅細胞裂解液(贈品) NH4CL2009 100ml

C 全血及組織稀釋液(贈品) 2010C1119 100ml

D 細胞洗滌液(贈品) 2010X1118 100ml

注:本試劑內容中各單品可根據貨號單獨購買(mǎi),客戶(hù)可根據實(shí)際使用情況自行選擇購買(mǎi)。

【預期用途】

適用于從動(dòng)物抗凝血液中分離白細胞,無(wú)菌條件下所分離的白細胞可用于分子生物學(xué)及

細胞培養等。本品僅供科研使用。

【檢驗原理】

本分離液為 FICOLL、羥乙一基淀粉 550 與泛影酸葡甲胺的混合液??鼓嚎稍诜蛛x液

中分層。離心時(shí),在 FICOLL、羥乙一基淀粉的作用下紅細胞與粒細胞聚集并迅速沉降;此時(shí),

白細胞仍處于分離液上層及分離液層,紅細胞污染可通過(guò)紅細胞裂解液裂解紅細胞去除。大

部分血小板可在細胞清洗低速離心過(guò)程中去除。

其他人及動(dòng)物多種比重細胞分離液,因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數及細胞

帶電不同,用戶(hù)在制定分離液時(shí)應提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細胞的名稱(chēng)。

【*但不提供的儀器及耗材】

可提供 400g 離心力的水平轉子離心機、15ml 玻璃離心管、吸管等。

【注意事項】

1. 使用前,本分離液需復溫至 18-22。為獲得*的實(shí)驗結果,在取血后 2 小時(shí)內

進(jìn)行實(shí)驗,血液提取后存放時(shí)間越長(cháng)細胞活性越低。

2. 實(shí)驗過(guò)程中,如需稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養液,其

成分會(huì )導致血細胞凝集大大降低細胞得率及純度。本公司生產(chǎn)的全血及組織稀釋液和細胞洗

滌液不含 Ca、Mg 離子、低內毒素水平且含細胞和保護成分,推薦使用。

3. *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素,其他抗凝劑也可使用,但會(huì )影響細胞活性。應

注意在血液稀釋過(guò)程中去除抗凝劑體積。

4. 當血液樣本粘度過(guò)高或血液樣本大于等于 3ml 時(shí),*稀釋方法:將血液于 18-22

250g 離心 10 分鐘,棄去血漿,補充添加全血及組織稀釋液(產(chǎn)品編號:2010C1119),添

加量為所棄去血漿體積的 1.5-2 倍,混勻備用。注:不當的稀釋方法會(huì )降低細胞得率及活性。

5. 實(shí)驗操作時(shí),不可使用含粉手套、不可使用內毒素含量過(guò)高的液體,手套中的粉末顆粒

及高內毒素會(huì )激活細胞從而降低細胞得率及活性。

6. 本實(shí)驗不可使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,其帶有的靜電作用將導致細胞

貼壁影響分離效果。

7. 吸取過(guò)多的白細胞層及分離液層會(huì )導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細

胞數量增加。

8. 吸取過(guò)多的白細胞層上層溶液會(huì )導致血漿蛋白及血小板混雜。

9. 如需進(jìn)行細胞計數,則需血液貯藏時(shí)間不得多于 10 小時(shí),否則將導致細胞被激活,得率降低。

10. 為去除所混雜的血小板,可在分離液上層加上 4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行二次離心。

11. 細胞純度可在步驟 10 后使用瑞氏染色方法確定,細胞活性可用臺盼藍處理后觀(guān)察。

12. 如所實(shí)驗后細胞得率或活性過(guò)低,請天津灝洋以尋求幫助,具體

詳見(jiàn)“【生產(chǎn)企業(yè)】”項目下內容。

【檢驗方法】

情況 A: 血液樣本小于 3ml 時(shí),實(shí)驗方法如下:

1. 取一支 15ml 離心管,加入 3ml 分離液置于 18-22。

2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22,400g 離心 20 分鐘。低溫(如 4 度)離

心會(huì )降低細胞得率。

3. 離心后,用吸管小心吸出分離液上層(包含白細胞的細胞層)0.5cm 以上的上清液部分,

棄去。

4. 用吸管小心吸取分離液層、白細胞層及紅細胞層置于另一新離心管內。

5. 在步驟 4 中所得離心管中加入 10ml 細胞洗滌液(產(chǎn)品編號:2010X1118)混勻。

6. 250g 離心 10 分鐘。

7. 棄上清,沉淀使用紅細胞裂解液(Cat#NH4CL2009)裂解紅細胞(裂解過(guò)程參見(jiàn)下述【紅

細胞裂解液使用說(shuō)明】)。

8. 裂解后再經(jīng)三次洗滌去除紅細胞內溶物和碎片后即為所需白細胞。

9.后以 0.5ml 后續試驗所需相應液體重懸細胞。

情況 B: 血液樣本大于等于 3ml 時(shí),實(shí)驗方法如下:

1. 首先按“【注意事項】第 4 條”所述方法稀釋血液樣本。

2. 取一支適當的離心管,加入分離液(加入量與稀釋后的血液樣本體積相等),置于

18-22。

3. 將經(jīng)稀釋處理的血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22,400g 離心 20 分鐘。低溫

(如 4 度)離心會(huì )降低細胞得率。注:加入血液樣本后,樣本及分離液總體積不得超過(guò)

離心管總體積的三分之二。

4. 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟

【紅細胞裂解液使用說(shuō)明】

本裂解液有別于市場(chǎng)上銷(xiāo)售的其它紅細胞裂解液,其配方經(jīng)過(guò)本公司優(yōu)化在裂解紅細

胞的同時(shí)不損傷并在一定程度上保護淋巴細胞(lymphocyte)或其它有細胞核的細胞,所獲

得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。另外,本裂解液中無(wú)DNARNA酶,配

合細胞分離液使用所提細胞可廣泛用于細胞培養及分子生物學(xué)實(shí)驗,請廣大用戶(hù)從優(yōu)選擇。

紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),也稱(chēng)ACK Lysis Buffer,是一種用于

從人或鼠等的血液或組織細胞樣品中裂解并去除無(wú)細胞核紅細胞的溶液。

本裂解液不適用于有細胞核紅細胞的裂解,例如鳥(niǎo)或禽類(lèi)的紅細胞。本裂解液經(jīng)過(guò)無(wú)菌

處理,處理過(guò)的血液或組織細胞樣品可以用于后續的原代培養、細胞融合以及核酸或蛋白的

提取及各種常規的分析和檢測。

使用說(shuō)明:

A. 對于組織細胞樣品:

a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,通過(guò)適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。

b. 加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體

積為1ml,則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。

c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4離心效果更佳。

d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(huì )影響后續的一些檢測。

e. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,重懸沉淀,400-500g離心

2-3分鐘,棄上清??稍僦貜?/span>1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀

體積的5倍。4離心效果更佳。

White Blood

Cell

f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

B. 對于組織細胞樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟:

a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,通過(guò)適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。

b. 對于0.2ml細胞沉淀加入1ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。本步驟在室溫

4度操作均可。

c. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,混勻。

d. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4離心效果更佳。

e. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(huì )影響后續的一些檢測。

f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

注:對于常規步驟,多一步洗滌過(guò)程中的離心,但可以節省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同

時(shí)不需要大體積的離心管??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。

C. 對于血液樣品:

a. 取新鮮抗凝血,400-500g離心5分鐘,離心棄上清。

b. 加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體

積為1ml,則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意:對于鼠

的血液,裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長(cháng)裂解時(shí)間至4-5分鐘,并且裂

解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞裂解。

c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4離心效果更佳。

d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(huì )影響后續的一些檢測。

e. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,重懸沉淀,400-500g離心

2-3分鐘,棄上清??稍僦貜?/span>1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀

體積的5倍。4離心效果更佳。

f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

注:對于微量或少量的血液樣品,可以在*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作,直接在第二步中加入10倍血

液體積的紅細胞裂解液,并在室溫或4裂解4-5分鐘。對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外

周血,宜延長(cháng)裂解時(shí)間至10分鐘,但通常不宜超過(guò)15分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞裂解。后續步驟相同。

D. 對于血液樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟:

a. 1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解4-5分鐘。

溫或4度操作均可。注意:對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜

延長(cháng)裂解時(shí)間至10分鐘,但通常不宜超過(guò)15分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促

進(jìn)紅細胞裂解。

b. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,混勻。

c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4離心效果更佳。

d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會(huì )影響后續的一些檢測。

e. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

注:對于常規步驟,多一步洗滌過(guò)程的離心,但可以節省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時(shí)

不需要大體積的離心管??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。

【儲存條件及有效期】

18-25避光保存,有效期 2 年。啟封后置 4保存,溶液變渾濁或感染細菌時(shí),產(chǎn)品

失效。本品為真空包裝,未啟封前置于 10 以下易出現白色結晶,影響分離效果。

【適用儀器】

半徑 15cm 水平轉子離心機。

【樣本要求】

本分離液要求血液為新鮮的抗凝血,血液收集時(shí)應無(wú)菌操作且在儲存、處理和運輸過(guò)

程中避免冷凍和冷藏。

【參考值(參考范圍)】

本實(shí)驗白細胞的提取率及純度均大于 80%。

【檢驗結果的解釋】

由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效

果,用戶(hù)可以調節離心轉數和離心的時(shí)間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗室自

定)。

【檢驗方法的局限性】

本試驗要求,在正常大氣壓下,樣本、分離液及分離環(huán)境溫度為 18-22。本分離液在

低溫時(shí)呈較高密度,在高溫時(shí)呈較低密度。

【產(chǎn)品性能指標】

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

無(wú)菌 直接接種培養 14 天后培養基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μ m 以上的不溶性微粒 20 粒以下,含

μ m 以上的不溶性微粒 5 粒以下

【參考文獻】

1 鄭德先,吳克復,褚建新.現代實(shí)驗血液學(xué)研究方法與技術(shù).北京醫科大學(xué)中國協(xié)和醫科大

學(xué)聯(lián)合出版社,1999

2 鄂征.組織培養.北京出版社,1995

3 朱立平,陳學(xué)清.免疫學(xué)常用實(shí)驗方法.人民軍醫出版社,2000

 

貨號

品牌

產(chǎn)品名稱(chēng)

規格

報價(jià)

單個(gè)核細胞分離液

 

 

 

 

LDS1075

TBD

人全血單個(gè)核細胞分離液(FICOLL配置)

200ml

400

LDS1075P

TBD

人臟器組織單個(gè)核細胞分離液(FICOLL配置)

100ml

400

LDS1075Z

TBD

人腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1080

TBD

大鼠全血單個(gè)核細胞分離液

200ml

400

LDS1080P

TBD

大鼠臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1080Z

TBD

大鼠腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1090

TBD

小鼠全血單個(gè)核細胞分離液

200ml

400

LDS1090P

TBD

小鼠臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1090Z

TBD

小鼠腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1094

TBD

兔外周血單個(gè)核細胞分離液

200ml

400

LDS1094P

TBD

兔臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1094Z

TBD

兔腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1077

TBD

狗外周血單個(gè)核細胞分離液

200ml

400

LDS1077P

TBD

狗臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1077Z

TBD

狗腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1084

TBD

牛外周血單個(gè)核細胞分離液

200ml

400

LDS1084P

TBD

牛臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1084Z

TBD

牛腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1083

TBD

豚鼠外周血單個(gè)核細胞分離液

200ml

400

LDS1083P

TBD

豚鼠臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1083Z

TBD

豚鼠腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1088C

TBD

雞外周血單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1088CP

TBD

雞臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1088CZ

TBD

雞腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1076

TBD

猴外周血單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1076P

TBD

猴臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1076Z

TBD

猴腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1108

TBD

豬外周血單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1108P

TBD

豬臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1110C

TBD

豬腸黏膜組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1108Z

TBD

豬腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1091

TBD

馬外周血單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1091P

TBD

馬臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1091Z

TBD

馬腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1084Y

TBD

羊外周血單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1084YP

TBD

羊臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1084YZ

TBD

羊腫瘤浸潤組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1079F

TBD

魚(yú)全血單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

LDS1079FP

TBD

魚(yú)臟器組織單個(gè)核細胞分離液

100ml

400

 



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