您好,歡迎來(lái)到上海研謹生物科技有限公司!
13585717991
021-65232515
產(chǎn)品型號: WBC1079Z
所屬分類(lèi):分離液試劑盒
產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-27
簡(jiǎn)要描述:名稱(chēng)產(chǎn)品編號規格A各種動(dòng)物外周血白細胞分離液詳見(jiàn)附錄12×100mlB紅細胞裂解液(贈品)NH4CL2009100mlC全血及組織稀釋液(贈品)2010C1119100mlD細胞洗滌液(贈品)2010X1118100ml本產(chǎn)品用于:分離狗腫瘤浸潤組織白細胞注:本試劑內容中各單品可根據貨號單獨購買(mǎi),客戶(hù)可根據實(shí)際使用情況自行選擇購買(mǎi)。
產(chǎn)品名稱(chēng):狗腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒
(細胞培養及分子生物學(xué))說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶(hù)使用,試劑內容如下:
名稱(chēng) 產(chǎn)品編號 規格
A 各種動(dòng)物外周血白細胞分離液 詳見(jiàn)附錄 1 2×100ml
B 紅細胞裂解液(贈品) NH4CL2009 100ml
C 全血及組織稀釋液(贈品) 2010C1119 100ml
D 細胞洗滌液(贈品) 2010X1118 100ml
注:本試劑內容中各單品可根據貨號單獨購買(mǎi),客戶(hù)可根據實(shí)際使用情況自行選擇購買(mǎi)。
【預期用途】
適用于從動(dòng)物抗凝血液中分離白細胞,無(wú)菌條件下所分離的白細胞可用于分子生物學(xué)及
細胞培養等。本品僅供科研使用。
【檢驗原理】
本分離液為 FICOLL、羥乙一基淀粉 550 與泛影酸葡甲胺的混合液??鼓嚎稍诜蛛x液
中分層。離心時(shí),在 FICOLL、羥乙一基淀粉的作用下紅細胞與粒細胞聚集并迅速沉降;此時(shí),
白細胞仍處于分離液上層及分離液層,紅細胞污染可通過(guò)紅細胞裂解液裂解紅細胞去除。大
部分血小板可在細胞清洗低速離心過(guò)程中去除。
其他人及動(dòng)物多種比重細胞分離液,因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數及細胞
帶電不同,用戶(hù)在制定分離液時(shí)應提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細胞的名稱(chēng)。
【*但不提供的儀器及耗材】
可提供 400g 離心力的水平轉子離心機、15ml 玻璃離心管、吸管等。
【注意事項】
1. 使用前,本分離液需復溫至 18-22℃。為獲得*的實(shí)驗結果,在取血后 2 小時(shí)內
進(jìn)行實(shí)驗,血液提取后存放時(shí)間越長(cháng)細胞活性越低。
2. 實(shí)驗過(guò)程中,如需稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養液,其
成分會(huì )導致血細胞凝集大大降低細胞得率及純度。本公司生產(chǎn)的全血及組織稀釋液和細胞洗
滌液不含 Ca、Mg 離子、低內毒素水平且含細胞和保護成分,推薦使用。
3. *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素,其他抗凝劑也可使用,但會(huì )影響細胞活性。應
注意在血液稀釋過(guò)程中去除抗凝劑體積。
4. 當血液樣本粘度過(guò)高或血液樣本大于等于 3ml 時(shí),*稀釋方法:將血液于 18-22℃以
250g 離心 10 分鐘,棄去血漿,補充添加全血及組織稀釋液(產(chǎn)品編號:2010C1119),添
加量為所棄去血漿體積的 1.5-2 倍,混勻備用。注:不當的稀釋方法會(huì )降低細胞得率及活性。
5. 實(shí)驗操作時(shí),不可使用含粉手套、不可使用內毒素含量過(guò)高的液體,手套中的粉末顆粒
及高內毒素會(huì )激活細胞從而降低細胞得率及活性。
6. 本實(shí)驗不可使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,其帶有的靜電作用將導致細胞
貼壁影響分離效果。
7. 吸取過(guò)多的白細胞層及分離液層會(huì )導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細
胞數量增加。
8. 吸取過(guò)多的白細胞層上層溶液會(huì )導致血漿蛋白及血小板混雜。
9. 如需進(jìn)行細胞計數,則需血液貯藏時(shí)間不得多于 10 小時(shí),否則將導致細胞被激活,得率降低。
10. 為去除所混雜的血小板,可在分離液上層加上 4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行二次離心。
11. 細胞純度可在步驟 10 后使用瑞氏染色方法確定,細胞活性可用臺盼藍處理后觀(guān)察。
12. 如所實(shí)驗后細胞得率或活性過(guò)低,請天津灝洋以尋求幫助,具體
詳見(jiàn)“【生產(chǎn)企業(yè)】”項目下內容。
【檢驗方法】
情況 A: 血液樣本小于 3ml 時(shí),實(shí)驗方法如下:
1. 取一支 15ml 離心管,加入 3ml 分離液置于 18-22℃。
2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22℃,400g 離心 20 分鐘。低溫(如 4 度)離
心會(huì )降低細胞得率。
3. 離心后,用吸管小心吸出分離液上層(包含白細胞的細胞層)0.5cm 以上的上清液部分,
棄去。
4. 用吸管小心吸取分離液層、白細胞層及紅細胞層置于另一新離心管內。
5. 在步驟 4 中所得離心管中加入 10ml 細胞洗滌液(產(chǎn)品編號:2010X1118)混勻。
6. 250g 離心 10 分鐘。
7. 棄上清,沉淀使用紅細胞裂解液(Cat#:NH4CL2009)裂解紅細胞(裂解過(guò)程參見(jiàn)下述【紅
細胞裂解液使用說(shuō)明】)。
8. 裂解后再經(jīng)三次洗滌去除紅細胞內溶物和碎片后即為所需白細胞。
9.后以 0.5ml 后續試驗所需相應液體重懸細胞。
情況 B: 血液樣本大于等于 3ml 時(shí),實(shí)驗方法如下:
1. 首先按“【注意事項】第 4 條”所述方法稀釋血液樣本。
2. 取一支適當的離心管,加入分離液(加入量與稀釋后的血液樣本體積相等),置于
18-22℃。
3. 將經(jīng)稀釋處理的血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22℃,400g 離心 20 分鐘。低溫
(如 4 度)離心會(huì )降低細胞得率。注:加入血液樣本后,樣本及分離液總體積不得超過(guò)
離心管總體積的三分之二。
4. 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟
【紅細胞裂解液使用說(shuō)明】
本裂解液有別于市場(chǎng)上銷(xiāo)售的其它紅細胞裂解液,其配方經(jīng)過(guò)本公司優(yōu)化在裂解紅細
胞的同時(shí)不損傷并在一定程度上保護淋巴細胞(lymphocyte)或其它有細胞核的細胞,所獲
得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。另外,本裂解液中無(wú)DNA及RNA酶,配
合細胞分離液使用所提細胞可廣泛用于細胞培養及分子生物學(xué)實(shí)驗,請廣大用戶(hù)從優(yōu)選擇。
紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),也稱(chēng)ACK Lysis Buffer,是一種用于
從人或鼠等的血液或組織細胞樣品中裂解并去除無(wú)細胞核紅細胞的溶液。
本裂解液不適用于有細胞核紅細胞的裂解,例如鳥(niǎo)或禽類(lèi)的紅細胞。本裂解液經(jīng)過(guò)無(wú)菌
處理,處理過(guò)的血液或組織細胞樣品可以用于后續的原代培養、細胞融合以及核酸或蛋白的
提取及各種常規的分析和檢測。
使用說(shuō)明:
A. 對于組織細胞樣品:
a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,通過(guò)適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。
b. 加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體
積為1ml,則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。
c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不
會(huì )影響后續的一些檢測。
e. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,重懸沉淀,400-500g離心
2-3分鐘,棄上清??稍僦貜?/span>1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀
體積的5倍。4℃離心效果更佳。
White Blood
Cell
f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。
B. 對于組織細胞樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟:
a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,通過(guò)適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。
b. 對于0.2ml細胞沉淀加入1ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。本步驟在室溫
或4度操作均可。
c. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,混勻。
d. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
e. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不
會(huì )影響后續的一些檢測。
f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。
注:對于常規步驟,多一步洗滌過(guò)程中的離心,但可以節省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同
時(shí)不需要大體積的離心管??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。
C. 對于血液樣品:
a. 取新鮮抗凝血,400-500g離心5分鐘,離心棄上清。
b. 加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體
積為1ml,則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意:對于鼠
的血液,裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長(cháng)裂解時(shí)間至4-5分鐘,并且裂
解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞裂解。
c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不
會(huì )影響后續的一些檢測。
e. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,重懸沉淀,400-500g離心
2-3分鐘,棄上清??稍僦貜?/span>1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀
體積的5倍。4℃離心效果更佳。
f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。
注:對于微量或少量的血液樣品,可以在*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作,直接在第二步中加入10倍血
液體積的紅細胞裂解液,并在室溫或4℃裂解4-5分鐘。對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外
周血,宜延長(cháng)裂解時(shí)間至10分鐘,但通常不宜超過(guò)15分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞裂解。后續步驟相同。
D. 對于血液樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟:
a. 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解4-5分鐘。
溫或4度操作均可。注意:對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜
延長(cháng)裂解時(shí)間至10分鐘,但通常不宜超過(guò)15分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促
進(jìn)紅細胞裂解。
b. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,混勻。
c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會(huì )影響后續的一些檢測。
e. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。
注:對于常規步驟,多一步洗滌過(guò)程的離心,但可以節省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時(shí)
不需要大體積的離心管??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。
【儲存條件及有效期】
18-25℃避光保存,有效期 2 年。啟封后置 4℃保存,溶液變渾濁或感染細菌時(shí),產(chǎn)品
失效。本品為真空包裝,未啟封前置于 10℃ 以下易出現白色結晶,影響分離效果。
【適用儀器】
半徑 15cm 水平轉子離心機。
【樣本要求】
本分離液要求血液為新鮮的抗凝血,血液收集時(shí)應無(wú)菌操作且在儲存、處理和運輸過(guò)
程中避免冷凍和冷藏。
【參考值(參考范圍)】
本實(shí)驗白細胞的提取率及純度均大于 80%。
【檢驗結果的解釋】
由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效
果,用戶(hù)可以調節離心轉數和離心的時(shí)間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗室自
定)。
【檢驗方法的局限性】
本試驗要求,在正常大氣壓下,樣本、分離液及分離環(huán)境溫度為 18-22℃。本分離液在
低溫時(shí)呈較高密度,在高溫時(shí)呈較低密度。
【產(chǎn)品性能指標】
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
無(wú)菌 直接接種培養 14 天后培養基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每 50ml 溶液中含 10μ m 以上的不溶性微粒 20 粒以下,含
μ m 以上的不溶性微粒 5 粒以下
【參考文獻】
1 鄭德先,吳克復,褚建新.現代實(shí)驗血液學(xué)研究方法與技術(shù).北京醫科大學(xué)中國協(xié)和醫科大
學(xué)聯(lián)合出版社,1999
2 鄂征.組織培養.北京出版社,1995
3 朱立平,陳學(xué)清.免疫學(xué)常用實(shí)驗方法.人民軍醫出版社,2000
貨號 | 品牌 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 報價(jià) |
中性粒細胞分離液試劑盒 |
|
|
|
|
LZS11131 | TBD | 人中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1091 | TBD | 大鼠外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1091P1 | TBD | 大鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1100 | TBD | 小鼠外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1100P | TBD | 小鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS11133 | TBD | 兔外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS11133P | TBD | 小鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1087 | TBD | 狗外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1087P | TBD | 狗臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1094 | TBD | 牛外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1094P | TBD | 牛臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1093 | TBD | 豚鼠外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1093P | TBD | 豚鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1098C | TBD | 雞外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1098CP | TBD | 雞臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1086 | TBD | 猴外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1086P | TBD | 猴臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1118 | TBD | 豬外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1118P | TBD | 豬臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1102 | TBD | 馬外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1102P | TBD | 馬臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1095 | TBD | 羊外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1095P | TBD | 羊臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1080F | TBD | 魚(yú)全血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1080FP | TBD | 魚(yú)臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
中性粒細胞分離液試劑盒 |
|
|
|
|
LZS11131 | TBD | 人中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1091 | TBD | 大鼠外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1091P1 | TBD | 大鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1100 | TBD | 小鼠外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1100P | TBD | 小鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS11133 | TBD | 兔外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS11133P | TBD | 小鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1087 | TBD | 狗外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1087P | TBD | 狗臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1094 | TBD | 牛外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1094P | TBD | 牛臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1093 | TBD | 豚鼠外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1093P | TBD | 豚鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |