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牛外周血白細胞分離液試劑盒

牛外周血白細胞分離液試劑盒

產(chǎn)品型號: WBC1086

所屬分類(lèi):分離液試劑盒

產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-27

簡(jiǎn)要描述:名稱(chēng)產(chǎn)品編號規格
A各種動(dòng)物外周血白細胞分離液詳見(jiàn)附錄12×100ml
B紅細胞裂解液(贈品)NH4CL2009100ml
C全血及組織稀釋液(贈品)2010C1119100ml
D細胞洗滌液(贈品)2010X1118100ml
本產(chǎn)品用于:分離牛外周血白細胞
注:本試劑內容中各單品可根據貨號單獨購買(mǎi),客戶(hù)可根據實(shí)際使用情況自行選擇購買(mǎi)。

詳細說(shuō)明:

產(chǎn)品名稱(chēng):牛外周血白細胞分離液試劑盒

 

(細胞培養及分子生物學(xué))說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶(hù)使用,試劑內容如下:

 名稱(chēng) 產(chǎn)品編號 規格

A 各種動(dòng)物外周血白細胞分離液 詳見(jiàn)附錄 1 2×100ml

B 紅細胞裂解液(贈品) NH4CL2009 100ml

C 全血及組織稀釋液(贈品) 2010C1119 100ml

D 細胞洗滌液(贈品) 2010X1118 100ml

注:本試劑內容中各單品可根據貨號單獨購買(mǎi),客戶(hù)可根據實(shí)際使用情況自行選擇購買(mǎi)。

【預期用途】

適用于從動(dòng)物抗凝血液中分離白細胞,無(wú)菌條件下所分離的白細胞可用于分子生物學(xué)及

細胞培養等。本品僅供科研使用。

【檢驗原理】

本分離液為 FICOLL、羥乙一基淀粉 550 與泛影酸葡甲胺的混合液??鼓嚎稍诜蛛x液

中分層。離心時(shí),在 FICOLL、羥乙一基淀粉的作用下紅細胞與粒細胞聚集并迅速沉降;此時(shí),

白細胞仍處于分離液上層及分離液層,紅細胞污染可通過(guò)紅細胞裂解液裂解紅細胞去除。大

部分血小板可在細胞清洗低速離心過(guò)程中去除。

其他人及動(dòng)物多種比重細胞分離液,因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數及細胞

帶電不同,用戶(hù)在制定分離液時(shí)應提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細胞的名稱(chēng)。

【*但不提供的儀器及耗材】

可提供 400g 離心力的水平轉子離心機、15ml 玻璃離心管、吸管等。

【注意事項】

1. 使用前,本分離液需復溫至 18-22。為獲得*的實(shí)驗結果,在取血后 2 小時(shí)內

進(jìn)行實(shí)驗,血液提取后存放時(shí)間越長(cháng)細胞活性越低。

2. 實(shí)驗過(guò)程中,如需稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養液,其

成分會(huì )導致血細胞凝集大大降低細胞得率及純度。本公司生產(chǎn)的全血及組織稀釋液和細胞洗

滌液不含 Ca、Mg 離子、低內毒素水平且含細胞和保護成分,推薦使用。

3. *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素,其他抗凝劑也可使用,但會(huì )影響細胞活性。應

注意在血液稀釋過(guò)程中去除抗凝劑體積。

4. 當血液樣本粘度過(guò)高或血液樣本大于等于 3ml 時(shí),*稀釋方法:將血液于 18-22

250g 離心 10 分鐘,棄去血漿,補充添加全血及組織稀釋液(產(chǎn)品編號:2010C1119),添

加量為所棄去血漿體積的 1.5-2 倍,混勻備用。注:不當的稀釋方法會(huì )降低細胞得率及活性。

5. 實(shí)驗操作時(shí),不可使用含粉手套、不可使用內毒素含量過(guò)高的液體,手套中的粉末顆粒

及高內毒素會(huì )激活細胞從而降低細胞得率及活性。

6. 本實(shí)驗不可使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,其帶有的靜電作用將導致細胞

貼壁影響分離效果。

7. 吸取過(guò)多的白細胞層及分離液層會(huì )導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細

胞數量增加。

8. 吸取過(guò)多的白細胞層上層溶液會(huì )導致血漿蛋白及血小板混雜。

9. 如需進(jìn)行細胞計數,則需血液貯藏時(shí)間不得多于 10 小時(shí),否則將導致細胞被激活,得率降低。

10. 為去除所混雜的血小板,可在分離液上層加上 4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行二次離心。

11. 細胞純度可在步驟 10 后使用瑞氏染色方法確定,細胞活性可用臺盼藍處理后觀(guān)察。

12. 如所實(shí)驗后細胞得率或活性過(guò)低,請天津灝洋以尋求幫助,具體

詳見(jiàn)“【生產(chǎn)企業(yè)】”項目下內容。

【檢驗方法】

情況 A: 血液樣本小于 3ml 時(shí),實(shí)驗方法如下:

1. 取一支 15ml 離心管,加入 3ml 分離液置于 18-22。

2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22,400g 離心 20 分鐘。低溫(如 4 度)離

心會(huì )降低細胞得率。

3. 離心后,用吸管小心吸出分離液上層(包含白細胞的細胞層)0.5cm 以上的上清液部分,

棄去。

4. 用吸管小心吸取分離液層、白細胞層及紅細胞層置于另一新離心管內。

5. 在步驟 4 中所得離心管中加入 10ml 細胞洗滌液(產(chǎn)品編號:2010X1118)混勻。

6. 250g 離心 10 分鐘。

7. 棄上清,沉淀使用紅細胞裂解液(Cat#NH4CL2009)裂解紅細胞(裂解過(guò)程參見(jiàn)下述【紅

細胞裂解液使用說(shuō)明】)。

8. 裂解后再經(jīng)三次洗滌去除紅細胞內溶物和碎片后即為所需白細胞。

9.后以 0.5ml 后續試驗所需相應液體重懸細胞。

情況 B: 血液樣本大于等于 3ml 時(shí),實(shí)驗方法如下:

1. 首先按“【注意事項】第 4 條”所述方法稀釋血液樣本。

2. 取一支適當的離心管,加入分離液(加入量與稀釋后的血液樣本體積相等),置于

18-22。

3. 將經(jīng)稀釋處理的血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22,400g 離心 20 分鐘。低溫

(如 4 度)離心會(huì )降低細胞得率。注:加入血液樣本后,樣本及分離液總體積不得超過(guò)

離心管總體積的三分之二。

4. 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟

【紅細胞裂解液使用說(shuō)明】

本裂解液有別于市場(chǎng)上銷(xiāo)售的其它紅細胞裂解液,其配方經(jīng)過(guò)本公司優(yōu)化在裂解紅細

胞的同時(shí)不損傷并在一定程度上保護淋巴細胞(lymphocyte)或其它有細胞核的細胞,所獲

得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。另外,本裂解液中無(wú)DNARNA酶,配

合細胞分離液使用所提細胞可廣泛用于細胞培養及分子生物學(xué)實(shí)驗,請廣大用戶(hù)從優(yōu)選擇。

紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),也稱(chēng)ACK Lysis Buffer,是一種用于

從人或鼠等的血液或組織細胞樣品中裂解并去除無(wú)細胞核紅細胞的溶液。

本裂解液不適用于有細胞核紅細胞的裂解,例如鳥(niǎo)或禽類(lèi)的紅細胞。本裂解液經(jīng)過(guò)無(wú)菌

處理,處理過(guò)的血液或組織細胞樣品可以用于后續的原代培養、細胞融合以及核酸或蛋白的

提取及各種常規的分析和檢測。

使用說(shuō)明:

A. 對于組織細胞樣品:

a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,通過(guò)適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。

b. 加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體

積為1ml,則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。

c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4離心效果更佳。

d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(huì )影響后續的一些檢測。

e. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,重懸沉淀,400-500g離心

2-3分鐘,棄上清??稍僦貜?/span>1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀

體積的5倍。4離心效果更佳。

White Blood

Cell

f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

B. 對于組織細胞樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟:

a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,通過(guò)適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。

b. 對于0.2ml細胞沉淀加入1ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。本步驟在室溫

4度操作均可。

c. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,混勻。

d. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4離心效果更佳。

e. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(huì )影響后續的一些檢測。

f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

注:對于常規步驟,多一步洗滌過(guò)程中的離心,但可以節省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同

時(shí)不需要大體積的離心管??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。

C. 對于血液樣品:

a. 取新鮮抗凝血,400-500g離心5分鐘,離心棄上清。

b. 加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體

積為1ml,則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意:對于鼠

的血液,裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長(cháng)裂解時(shí)間至4-5分鐘,并且裂

解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞裂解。

c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4離心效果更佳。

d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(huì )影響后續的一些檢測。

e. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,重懸沉淀,400-500g離心

2-3分鐘,棄上清??稍僦貜?/span>1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀

體積的5倍。4離心效果更佳。

f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

注:對于微量或少量的血液樣品,可以在*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作,直接在第二步中加入10倍血

液體積的紅細胞裂解液,并在室溫或4裂解4-5分鐘。對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外

周血,宜延長(cháng)裂解時(shí)間至10分鐘,但通常不宜超過(guò)15分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞裂解。后續步驟相同。

D. 對于血液樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟:

a. 1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解4-5分鐘。

溫或4度操作均可。注意:對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜

延長(cháng)裂解時(shí)間至10分鐘,但通常不宜超過(guò)15分鐘,并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促

進(jìn)紅細胞裂解。

b. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液,混勻。

c. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4離心效果更佳。

d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會(huì )影響后續的一些檢測。

e. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

注:對于常規步驟,多一步洗滌過(guò)程的離心,但可以節省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好一些,同時(shí)

不需要大體積的離心管??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。

【儲存條件及有效期】

18-25避光保存,有效期 2 年。啟封后置 4保存,溶液變渾濁或感染細菌時(shí),產(chǎn)品

失效。本品為真空包裝,未啟封前置于 10 以下易出現白色結晶,影響分離效果。

【適用儀器】

半徑 15cm 水平轉子離心機。

【樣本要求】

本分離液要求血液為新鮮的抗凝血,血液收集時(shí)應無(wú)菌操作且在儲存、處理和運輸過(guò)

程中避免冷凍和冷藏。

【參考值(參考范圍)】

本實(shí)驗白細胞的提取率及純度均大于 80%。

【檢驗結果的解釋】

由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效

果,用戶(hù)可以調節離心轉數和離心的時(shí)間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗室自

定)。

【檢驗方法的局限性】

本試驗要求,在正常大氣壓下,樣本、分離液及分離環(huán)境溫度為 18-22。本分離液在

低溫時(shí)呈較高密度,在高溫時(shí)呈較低密度。

【產(chǎn)品性能指標】

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

無(wú)菌 直接接種培養 14 天后培養基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μ m 以上的不溶性微粒 20 粒以下,含

μ m 以上的不溶性微粒 5 粒以下

【參考文獻】

1 鄭德先,吳克復,褚建新.現代實(shí)驗血液學(xué)研究方法與技術(shù).北京醫科大學(xué)中國協(xié)和醫科大

學(xué)聯(lián)合出版社,1999

2 鄂征.組織培養.北京出版社,1995

3 朱立平,陳學(xué)清.免疫學(xué)常用實(shí)驗方法.人民軍醫出版社,2000

 

貨號

品牌

產(chǎn)品名稱(chēng)

規格

報價(jià)

中性粒細胞分離液試劑盒

 

 

 

 

NK2011H

TBD

NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011RAT

TBD

大鼠外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011RATP

TBD

大鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011M

TBD

小鼠外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011MP

TBD

小鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011R

TBD

兔外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011RP

TBD

兔臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011D

TBD

狗外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011DP

TBD

狗臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011B

TBD

牛外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011BP

TBD

牛臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011G

TBD

豚鼠外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011GP

TBD

豚鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011C

TBD

雞外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011CP

TBD

雞臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NKHY2011M

TBD

猴外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NKHY2011MP

TBD

猴臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NKHY2011P

TBD

豬外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NKHY2011PP

TBD

豬臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NKHY2011H

TBD

馬外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NKHY2011P

TBD

馬臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011G

TBD

羊外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011GP

TBD

羊臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011H

TBD

NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011RAT

TBD

大鼠外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011RATP

TBD

大鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011M

TBD

小鼠外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011MP

TBD

小鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011R

TBD

兔外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011RP

TBD

兔臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011D

TBD

狗外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011DP

TBD

狗臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011B

TBD

牛外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011BP

TBD

牛臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011G

TBD

豚鼠外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011GP

TBD

豚鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011C

TBD

雞外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NK2011CP

TBD

雞臟器組織NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

NKHY2011M

TBD

猴外周血NK細胞分離液試劑盒

4*50ml

600

 



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