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021-65232515
產(chǎn)品型號:
所屬分類(lèi):動(dòng)物疾病類(lèi)ELISA快速檢測試劑盒
產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-30
簡(jiǎn)要描述:氯霉素快速檢測試劑盒可檢測得出相應殘留物氯霉素的含量。
氯霉素快速檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)
一、試劑盒說(shuō)明書(shū)原理
本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法,在微孔條 上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氯霉素將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氯霉素抗體,加入 酶標記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與其 所含殘留物氯霉素的含量成負相關(guān),與標準曲線(xiàn)比 較即可得出相應殘留物氯霉素的含量。
二、試劑盒說(shuō)明書(shū)特性
u 孵育溫度: 25℃
u 孵育時(shí)間: 30min~30min~15min
蛋類(lèi)、牛奶(方法一)····························· 0.1 ppb 尿液、血清、腸衣、飼料、奶粉··················· 0.05ppb 組織、肝臟、蜂蜜、牛奶(方法二)············· 0.025ppb
氯霉素· ······································· 100%
甲砜霉素 ······································ < 0.1%
氟甲砜霉素 ······································ < 0.1%
組織、肝臟 ································ | 85%±20% | ||
蜂蜜、腸衣 ································ | 83%±25% | ||
牛奶、飼料 ································ | 75%±23% | ||
尿液、血清 ································ | 70%±18% | ||
三、試劑盒組成 |
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1 | 微量測試孔 | 每條 8 孔,一板 12 條 | |
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| 標準液×6 瓶 | 0ppb | 0.05ppb |
2 | 0.15ppb | 0.45ppb | |
(1ml/瓶) | |||
| 1.35ppb | 4.05ppb | |
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3 | 酶標記物 | 12ml | 紅色帽 |
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4 | 抗體濃縮液 | 1ml | 藍色帽 |
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5 | 底物 A 液 | 7ml | 白色帽 |
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6 | 底物 B 液 | 7ml | 黑色帽 |
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7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
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8 | 20X 濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
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9 | 2X 濃縮復溶液 | 50ml | 透明帽 |
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四、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、 刻度移液管、天平(感量 0.01g)、氮 吹儀、恒溫箱
微量移液器:?jiǎn)蔚?20~200µl、單道 100~1000µl、多道 30~300 µl
試 劑:乙酸乙酯、乙腈、亞硝基鐵氰化納、葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)、硫酸鋅、醋酸鈉、正己烷、醋酸
五、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
(a)實(shí)驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試 劑時(shí)要更換吸頭。
(b)實(shí)驗之前須檢查各種實(shí)驗器具是否干凈, 必要時(shí)可對實(shí)驗器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí) 驗結果。
樣本前處理需配制:
配液 1 C 液(牛奶、奶粉樣本):
10.7g 亞硝基鐵氰化那鈉加去離子水 100ml 溶解。
配液 2 D 液(牛奶、奶粉樣本):
28.8g 硫酸鋅加去離子水 100ml 溶解。 配液 3 pH4.8 100mM 醋酸鈉緩沖液(尿樣本):稱(chēng) 2.4g 醋酸鈉和 1.2ml 醋酸加去離子水500ml 溶解混合。
配液 4 乙腈-水溶液:
V 乙腈:VH2O=84:16
配液 5 樣本復溶液:將 2X 濃縮復溶液用去離子水按 1:1 稀釋。
| (1 份濃縮復溶掖+1 份去離子水,用于抗體 | 氮氣流下干燥;用 0.5ml 樣本復溶液溶解干燥 | |
| 的稀釋和樣本提取后的復溶)。 | 的殘留物,混合 30s; | |
u | 樣本處理: | 3、 取 50 µl 用于分析。 |
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(a)組織、肝臟樣本處理方法 | 樣本稀釋倍數: 0.5 倍 | ||
1、 稱(chēng)取均質(zhì)后的樣本 3±0.05g 于 50ml 離心管中, | 檢測下限:0.025ppb | 定量下限:0.1 ppb | |
| 先加入 3ml 去離子水混勻后再加入 6ml 乙酸乙 | 注:我們推薦 0.1 ppb 為陽(yáng)性樣本的 cut off 值。 | |
| 酯,振蕩 2min,室溫 4000r/min 以上離心 10min; | (e)腸衣處理方法 |
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2、 取出 4ml 上層液體在 50-60℃氮氣流中吹干; | 1、 用均質(zhì)器均質(zhì)樣本;注:干樣本需剪碎(長(cháng)度 | ||
3、 加入 1 ml 正己烷溶解干燥的殘留物,再加 1ml | 不超 5mm)后再均質(zhì),濕樣本需用去離子水漂 | ||
| 樣本復溶液混合 30s,室溫 4000r/min 以上離心 | 洗 20min 以上去除表面的鹽份,瀝干后再均質(zhì); | |
| 5min;去除上層有機相; | 2、 稱(chēng) 1±0.05g 均質(zhì)后的樣本于 50ml 離心管中,加 | |
4、 取 50 µl 下層相用于分析。 | 入 10ml 乙酸乙酯,振蕩 2min,室溫 4000r/min | ||
| 樣本稀釋倍數: 0.5 倍 | 以上離心 10min; |
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(b)血清血漿處理方法 | 3、 取 5ml 上層液體(相當于 0.5g 的樣本)在氮氣 | ||
1、 取 1ml 血清或血漿至試管中,加 2ml 乙酸乙酯 | 流下 50-60℃干燥; |
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| 振蕩 1min;靜置使水相與有機相分層或室溫 | 4、 加入 1 ml 正己烷溶解干燥的殘留物,再加 0.5ml | |
| 4000r/min 離心 5min; | 樣本復溶液振蕩混合 30s,室溫 4000r/min 以上 | |
2、 移取上層的乙酸乙酯至另一試管中,用氮氣流 | 離心 5min;除上層有機相; | ||
| 50℃水浴中干燥;殘留物用 1 ml 樣本復溶液溶 | 5、 取下層 50 µl 用于分析。 | |
| 解,混合 30s; | 樣本稀釋倍數: 1 倍 |
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3、 取 50 µl 下層相用于分析。 | (f)牛奶樣本處理方法一 |
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| 樣本稀釋倍數: 1 倍 | 1、 將牛奶樣本 10℃4000r/min 以上離心 10min 處 | |
(c) 尿液處理方法 | 理,吸除上層脂肪;然后取 5ml 去除脂肪奶樣 | ||
1、 移取 2ml 尿液到離心管中,加 pH4.8 100mM 醋 | 至 50ml 離心管中,加入 150µl C 液出現沉淀, | ||
| 酸鈉緩沖液 0.5ml 混合;加 40µl 葡萄糖苷酸酶 | 短暫振蕩后加入 150µl D 液混合; | |
| (Merck,Art.No.4114)到稀釋的尿液中,在 37℃ | 2、 15℃4000r/min 以上離心 10min,移取上層液; | |
| 水解至少 2 小時(shí)(或過(guò)夜); | 用樣本復溶液以等體積稀釋上層液,混合 30s; | |
2、 該溶液恢復至室溫后加入 8ml 乙酸乙酯混合 | 3、 取 50µl 用于分析。 |
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| 1min;室溫 4000r/min 離心 10min,取出 4ml | 注:如果離心后仍然渾濁,再重復沉淀過(guò)程。 | |
| 上層液體在氮氣下 50~60℃干燥; | 樣本稀釋倍數:2 |
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3、 用 1ml 樣本復溶液溶解干燥的殘留物,混合 | 檢測下限:0.1ppb | 定量下限:0.15ppb | |
| 30s; | (g)牛奶樣本處理方法二 |
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4、 取 50µl 用于分析。 | 1、 將牛奶樣本 10℃4000r/min 以上離心 10min 處 | ||
| 樣本稀釋倍數: 1 倍 | 理,吸除上層脂肪;然后取 5ml 去除脂肪奶樣 | |
(d)蜂蜜處理方法 | 至 50ml 離心管中,加入 250µl C 液和 250µl D | ||
1、 取 2±0.05 g 蜂蜜,放入離心管中,用 4ml 去離 | 液*混合,4-12℃4000r/min 以上離心 10min。 | ||
| 子水溶解;加入 4ml 乙酸乙酯振蕩 2min,室溫 | 如無(wú)冷凍離心機,將樣本置冰箱中冷卻到 8℃; | |
| 4000r/min 以上離心 10min; | 2、 轉移出 2.2ml 上層液(相當于 2ml 奶樣)至新 | |
2、 移取 2ml 上層清澈液到另一離心管中,50-60℃ | 的離心管中,加入 4ml 乙酸乙酯上振蕩 2min; |
室溫(20-25℃)4000r/min 以上離心 10min ; 3、 吸取2ml 乙酸乙酯上層液體(相當于1ml 奶樣),
50-60℃氮氣流下*干燥;用 0.5ml 樣本復溶 液溶解干燥的殘留物,混合 30s;
4、 取 50µl 用于分析。樣本稀釋倍數:0.5
檢測下限:0.025ppb 定量檢測限:0.05ppb
由于陰性樣本可能會(huì )產(chǎn)生背景干擾 (在某些 情況下干擾數值在標準 2 到 3 之間),所以推 薦標準 3 作為陽(yáng)性結果的 CUT OFF 判斷值。
(h)奶粉樣本處理方法
1、 稱(chēng) 2±0.05 g 奶粉至 50ml 離心管中,加入 10ml去離子水振蕩溶解;加入 1ml C 液和 1ml D 液*混合;4-12℃4000r/min 以上離心 10min。若無(wú)冷凍離心機,請預先將樣本冷卻到 8℃;
2、 轉移出 3.6ml 上層液(相當于 0.6g 奶粉)至新 的離心管中,加入 6ml 乙酸乙酯振蕩 5min;室 溫(20-25℃)4000r/min 以上離心 10min;
3、 吸取 4ml 乙酸乙酯上層液體(相當于 0.4g 奶 粉),50-60℃氮氣流下*干燥;用 0.4ml 樣
本復溶液溶解干燥的殘留物,混合 30s; 4、 取 50 µl 用于分析。
樣本稀釋倍數:1
檢測下限:0.05ppb 定量檢測限:0.15ppb
由于陰性樣本可能會(huì )產(chǎn)生背景干擾 (在某些情
況下干擾數值在標準 2 到 3 之間),所以推薦 標準 3 作為陽(yáng)性結果的 CUT OFF 判斷值。
(i)蛋類(lèi)處理方法
1、 稱(chēng)取 3±0.05 g 均質(zhì)的樣本,加入 9ml 乙腈-水溶 液振蕩 2min,15℃4000r/min 以上離心 10min;
2、 取 3ml 上層相與 3ml 去離子水水混合,加入4.5ml 乙酸乙酯,混合 1min,15℃4000r/min 以上離心 10min;取上層有機相置 50-60℃下氮氣 流吹干;
3、 加入 1ml 正己烷溶解殘留物后,用 2ml 樣本復 溶液混合 30s,室溫 4000r/min 以上離心 5min;
去除上層有機相; 4、 取 50 µl 用于分析。
樣本稀釋倍數:
| 檢測下限:0.1ppb | 定量檢測限:0.3ppb | 7、 將孔內液體甩干,用已稀釋的洗滌液 250µl/孔 | ||||
(j)飼料處理方法 |
| 洗板 4~5 次,每次間隔 15~30 秒,用吸水紙 | |||||
1、 稱(chēng)取 2±0.05g 均質(zhì)過(guò)的飼料樣本,加入 2ml 去 | 拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺 | ||||||
| 離子水,再加入 6ml 乙酸乙酯,充分振蕩 2min, | 破)。 |
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| 15℃ 4000r/min 以上離心 10min; | 8、 每孔加入酶標記物100µl,蓋板膜蓋板后置25℃ | |||||
2、 取 3ml 上層有機相到試管中 56℃下氮氣吹干; | 環(huán)境中反應 30min。將孔內液體甩干,用洗滌 | ||||||
3、 加入 1ml 正己烷溶解殘留物,用 1ml 樣本復溶 | 液充分洗,4~5 遍(同上),用吸水紙拍干(拍 | ||||||
| 液混合 30s,室溫 4000r/min 以上離心 5min;去 | 干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。 | |||||
| 除上層有機相; |
| 9、 顯色:加入底物 A 液 50µl/孔,再加入底物 B | ||||
4、 取 50 µl 用于分析。 |
| 液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯 | |||||
| 樣本稀釋倍數:1 |
| 色 15min。 |
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六、 酶標免疫分析程序: |
| 10、 測定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻, | |||||
| 設定酶標儀于 450nm 處(建議用雙波長(cháng) 450/63 | ||||||
u | 測定前應須知: |
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| 0nm 檢測,5min 內讀數),測定每孔 OD 值。 | ||||||
1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫 | |||||||
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| (20~25℃)。 |
| 七、結果判定 |
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2、 使用之后立即將所有試劑放回 2~8℃。 | 結果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方 | ||||||
3、 在 ELISA 分析中的再現性,很大程度上取決于 | 法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與 | ||||||
| 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測定 | 其所含氯霉素量成負相關(guān)。 |
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| 程序中的要點(diǎn)。 |
| 1、粗略判定: |
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4、 所有恒溫孵育過(guò)程,避免光線(xiàn)照射,用蓋板膜 | 用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出 | ||||||
| 蓋住微孔板。 |
| 其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本 1 的吸光度值為 0.3, | ||||
u | 操作步驟: |
| 樣本 2 的吸光度值為 1.0,標準液吸光度值分別是: | ||||
1、 從 2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~ | 0ppb 為 2.243;0.05ppb 為 1.816;0.15ppb 為 1.415; | ||||||
| 25℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使 | 0.45ppb 為 0.74;1.35ppb 為 0.313;4.05ppb 為 0.155。 | |||||
| 用前均須搖勻。 |
| 則樣本 1 的濃度范圍是 1.35ppb~4.05ppb;樣本 2 | ||||
2、 取出框架及需要數量的微孔,將不用的微孔放 | 的濃度范圍是 0.15ppb~0.45ppb,乘以其對應的稀 | ||||||
| 入自封袋,保存于 2-8℃。 | 釋倍數即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。 | |||||
3、 配液:將 40ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去 | 2、定量分析 |
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| 離子水按照 1:19 稀釋?zhuān)?/span>1 份濃縮洗滌液+19 份 | (1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分 | |||||
| 去離子水),或按所需用量配制洗滌液。 | 吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙 | |||||
4、 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每 | 孔)除以*個(gè)標準(0 標準)的吸光度值,再乘 | ||||||
| 個(gè)樣本和標準品做 2 孔平行,并記錄標準孔和 | 以 100%,即 |
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| 樣本孔所在的位置。 |
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| B |
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5、 將濃縮抗體用樣本復溶液 11 倍稀釋?zhuān)?/span>1 份抗體 | 百分吸光率(%)= | ×100% | |||||
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加入 10 份稀釋液,按需配制使用) | B0 | ||||||
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 | |||||||
6、 加標準品/樣本 50µl/孔到各自的微孔中,然后加 | |||||||
B0—0ng/ml 標準溶液的平均吸光度值 | |||||||
加入抗體工作液 50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕 | |||||||
(2)標準曲線(xiàn)的繪制與計算 | |||||||
振蕩混勻。25℃環(huán)境中反應 30min。 | |||||||
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| 以標準品百分吸光率為縱坐標,以氯霉素標準 |
品濃度(ng/ml)的半對數為橫坐標,繪制標準曲線(xiàn) 圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線(xiàn)中,從標準 曲線(xiàn)上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋 倍數即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于 大量樣本的準確、快速分析。(歡迎索?。?/span>
八、 注意事項
1、 室溫低于 25℃或試劑及標本未回到室溫(20~25℃)會(huì )導致所有標準的 OD 值偏低。
2、 在洗板過(guò)程中如果出現板孔干燥的情況,則會(huì ) 伴隨著(zhù)標準曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復性不好的現象。 所以洗板拍干后應立即進(jìn)行下一步操作。
3、 混合要均勻,否則會(huì )出現重復性不好的現象。
4、 反應終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。
5、 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜 使用會(huì )引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用 不同批號的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標準物質(zhì) 和無(wú)色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴 露在光線(xiàn)下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應當棄之。標 準品 1 的吸光度值小于 0.5 時(shí),表示試劑可能 變質(zhì)。
8、 該試劑盒理想反應溫度為 25℃,溫度過(guò)高或過(guò) 低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
九、儲藏條件和保質(zhì)期
1、 儲藏條件:試劑盒于 2-8℃保存,不要冷凍。
2、 保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見(jiàn) 包裝盒。
提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正 常有效,不影響實(shí)驗結果,請放心使用。
炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR 法)
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氯霉素檢測條
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